MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达

目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞,检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞,检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活,呈克隆球样悬浮生长,并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球,其miR-590-3p表达上调,该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。     

miR-146b-5p异常表达对胰腺癌细胞生物学特性的影响

MicroRNAs( miRNAs)是由一类内源性的非编码RNA组成,长度大约20 ～24 nt,来源于长的前体pri-miRNA和pre-miRNA[1-3].在多细胞生物体中,它通过不完全碱基互补配对的方式识别靶位点,转录后调控基因的表达[4-5].尽管过去的几年中通过基因芯片筛查肿瘤特异性miRNA有很大的进展[6],但miRNA影响肿瘤形成和发展的机制仍不清楚.本研究检测6株胰腺癌细胞miR-146b-5p的表达,观察其对胰腺癌细胞生物学特性的影响. 一、材料与方法 1.细胞培养和转染:人胰腺癌细胞系MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC1、5W1990、PC-3为同济医院胆胰外科实验室保存,3例正常胰腺组织为胆管肿瘤行胰十二指肠切除术的手术标本.取对数生长期miR-146b-5p表达最低的MIAPaCa-2细胞,采用lipofectamineTM 2000将miR-146b-5p mimics和阴性对照miRNA(广州锐博公司)分别转染细胞,按照lipo2000转染试剂盒说明书操作.     

MAP3K10在胰腺癌中的表达及其意义

目的:探讨丝裂原活化蛋白3激酶10（MAP3K10）在胰腺癌中的表达。
方法:应用免疫组织化学染色技术，Western blot及定量RT-PCR检测MAP3K10在胰腺癌及癌旁组织中的表达。
结果:(1)免疫组化染色阳性细胞计数显示MAP3K10在胰腺癌组织中的阳性细胞数（100%呈强阳性）明显多于癌旁组织（仅25%呈弱阳性）(P＜0.05)；(2)Western blot检测显示，在91.7%的胰腺癌组织中MPA3K10蛋白的表达量高于癌旁组织；(3)qRT-PCR检测显示，MAP3K10mRNA在胰腺癌及癌旁组织中均有表达，但前者的表达水平明显高于后者（P＜0.01）。
结论:MAP3K10在胰腺癌中存在异常激活，可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用，有望成为胰腺癌新的治疗靶点

     

鸢尾黄酮通过促进自噬抑制结肠癌细胞增殖并诱导其凋亡研究

目的：探究鸢尾黄酮对结肠癌细胞自噬及其对细胞增殖能力和凋亡的影响。方法：鸢尾黄酮对结肠癌细胞的半抑制浓度（IC50）采用CCK-8法检测;结肠癌细胞的长期增殖能力采用克隆平板实验检测;采用CCK-8法检测不同抑制剂预处理后鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响;采用蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白的变化情况;透射电镜观察结肠癌细胞中自噬体的数量;采用CCK-8法检测小干扰RNA（siRNA）沉默自噬关键蛋白ATG5转染后鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响。结果：通过不同浓度鸢尾黄酮作用下结肠癌细胞系SW480的生长抑制情况绘制IC50曲线,确定其IC50为（221.90±35.31） μM;克隆平板实验表明鸢尾黄酮对结肠癌细胞的长期增殖能力具有抑制作用;凋亡抑制剂Z-VAD显著逆转了鸢尾黄酮对结肠癌细胞的增殖抑制作用;Western blot实验结果表明,随着鸢尾黄酮作用浓度的升高,SW480细胞内LC3-Ⅱ含量逐渐上升,p62含量下降;电镜结果表明,经鸢尾黄酮作用后SW480细胞内自噬体含量明显增加;沉默ATG5可部分逆转鸢尾黄酮对SW480细胞的增殖抑制作用。结论：鸢尾黄酮通过促进自噬抑制了结肠癌细胞的增殖能力,并诱导结肠癌细胞的凋亡。     

鸢尾黄酮通过促进自噬抑制结肠癌细胞增殖并诱导其凋亡[基金项目：福建省自然科学基金项目（2016J01617）]

背景与目的：探究鸢尾黄酮对结肠癌细胞自噬的影响及其对细胞增殖能力和凋亡的影响。方法：鸢尾黄酮对结肠癌细胞的半抑制浓度（IC50）采用CCK-8法检测;结肠癌细胞的长期增殖能力采用克隆平板实验检测;CCK-8法检测不同抑制剂预处理后鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响;蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白的变化情况;透射电镜观察结肠癌细胞中自噬体的数量;小干扰RNA（siRNA）沉默自噬关键蛋白ATG5,CCK-8法检测联合凋亡抑制剂作用下鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响。结果：通过CCK-8法分析不同浓度鸢尾黄酮作用下结肠癌细胞系SW480的生长抑制情况后绘制半抑制浓度（IC50）曲线,确定其半抑制浓度（IC50）为（221.9±35.31）μM;克隆平板实验表明鸢尾黄酮对结肠癌细胞的长期增殖能力具有抑制作用;凋亡抑制剂Z-VAD显著逆转了鸢尾黄酮对结肠癌细胞的增殖抑制作用;Western blot实验结果表明随着鸢尾黄酮作用浓度的升高,SW480细胞内LC3-II含量逐渐增高,p62含量下降;电镜结果表明鸢尾黄酮作用后SW480细胞内自噬体含量明显增加;沉默ATG5部分逆转鸢尾黄酮对SW480细胞的增殖抑制作用。结论：鸢尾黄酮通过促进自噬抑制了结肠癌细胞的增殖能力并诱导结肠癌细胞的凋亡。     

侧方入路腹腔镜下完全腹膜外成人脐疝修补术5例经验

背景与目的：脐疝是较常见的腹壁疝之一,手术治疗是其唯一可治愈的治疗方法。随着腔镜技术的发展,腔镜在疝与腹壁外科的应用不断深入。本文旨在探讨经侧方入路腹腔镜下完全腹膜外脐疝修补术的可行性及安全性。 方法：2019年6月—2020年1月厦门大学附属中山医院普通外科为5例脐疝患者实施侧方入路的腹腔镜下完全腹膜外脐疝修补术,其中男3例,女2例;就诊时年龄30~53岁,平均41.8岁。回顾性分析该5例患者的临床病例资料及随访情况。 结果：5例均顺利完成手术;平均手术时间（70.2±5.8）min,术后6~8 h下床活动,术后平均住院时间（3.2±0.7）d;术后脐部积液1例,无出血、肠梗阻、肠瘘等严重并发症;随访1~7个月无复发。 结论：经侧方入路行腹腔镜下完全腹膜外成人脐疝修补术安全可行。侧方入路的手术方式操作难度相对较低,临床应用前景良好。     

壶腹部周围癌的早期诊断

目的探索有效的壶腹部周围癌的早期诊断方法。方法回顾性分析2005年7月至2009年7月收治的32例无明显症状的早期壶腹部周围癌的临床资料。结果本组32例均在手术后痊愈出院。肿瘤学定量检测中CA19—9升高最为显著,与参考值比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。CEA和CA125的增高幅度相对较小,与参考值相较,差异无统计学意义（P〉0．05）。但在胰头癌、胆总管远端肿瘤和十二指肠乳头癌病例间比较,三者间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论对于仅有胆总管增宽和轻度黄疸的壶腹部周围癌病人,多排螺旋CT薄层扫描、MRI和MRCP检查可以弥补B型超声的不足,肿瘤学标记物的定量检查可以提高诊断的准确性。     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.