白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响

目的：观察表达mIL-18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞（AdmIL-18/BNL.CL2)经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法：实验组小鼠经脾移植AdmIL-18/BNL.CL2，同时设LacZ病毒对照组（Ad-LacZ/BNL.CL2),BNL.CL2细胞对照组及空白对照组。2周后处死，留取血清，制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液，提取肝组织总RNA。采用ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量；采用半定量RT－PCR法，检测肝组织细胞因子mRNA相对表达量；以LDH释放法测定腹腔Mφ杀伤活性和脾NK细胞活性，用MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果：实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中，IL－18、IL－2、IFN－γ、TNF-α稔均高于其它对照组，而IL－4、IL－10水平则低于对照组；半定量RT－PCR结果与ELISA检测结果一致；同时，实验组腹腔Mφ的杀伤活性和脾NK细胞活性，及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论：AdmIL-18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达mIL-18;AdmIL-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后，可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性，活化腹腔Mφ，促进Th1类细胞因子表达，抑制Th2类细胞因子的分泌。     

抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用

目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用.方法采用流式细胞仪检测RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,并设立正常对照组.结果RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比明显增多(P<0.01);关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01).结论外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HIA-DR的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用.     

原发性高血压红细胞CD35分子表达及其免疫调整

目的 :探讨原发性高血压致动脉硬化者红细胞Ⅰ型补体受体 (CR1 、CD3 5)分子表达和血清前炎症细胞因子水平 ,以及胸腺素的非特异免疫调整作用。方法 :用间接免疫荧光法 ,流式细胞仪检测患者红细胞CD3 5,用酶联免疫吸附法检测其血清IL -6、IL -8、TNF -α水平 ,用聚乙二醇 (PEG)法检测循环免疫复合物 (CIC) ,并使用胸腺素调整患者上述免疫指标异常。结果 :患者红细胞CD3 5分子表达明显低下 (P <0 .0 0 1) ,CIC在血管内大量堆积 ,而血清IL -6、IL -8、TNF -α水平明显增高 (P <0 .0 0 19) ,通过实验治疗 ,上述指标均明显改善。结论 :红细胞CD3 5分子表达和前炎症细胞因子异常作为重要免疫病理机制 ,参与了高血压病动脉硬化的发生发展 ,而胸腺素对促进红细胞CD3 5表达 ,清除过量CIC ,下调前炎症细胞因子水平均具重要的临床意义     

冠心病患者循环活化血小板的改变及阿斯匹林抵抗的处理

目的　探讨冠心病患者循环活化血小板 (CAP)的变化及对阿斯匹林抵抗的处理。方法　以纤维蛋白原受体 (PAC - 1)、P -选择素 (CD6 2P)作为分子标志物 ,FCM三色免疫荧光分析CAP ,观察正常人及冠心病患者CAP变化。结果　正常人静止血小板膜表面PAC - 1和CD6 2P表达较低。冠心病患者血液中表达PAC - 1的数量与正常人比较有非常显著差异 (P <0 0 0 1)。阿斯匹林治疗后冠心病患者的PAC - 1及CD6 2P表达呈下降趋势 (P值分别为 <0 0 0 1及 <0 0 5)。抵克力特可显著降低存在阿斯匹林抵抗现象的病人PAC - 1的表达 (P <0 0 0 1)。结论　冠心病患者血液中PAC- 1明显增高 ,阿斯匹林可以显著降低冠心病患者PAC - 1及CD6 2P的表达水平。抵克力特可显著降低存在阿斯匹林抵抗现象的病人PAC - 1的表达     

胃癌手术前后活化CD69、HLA-DR的变化与临床意义

目的了解胃癌患者围手术期的免疫功能变化,探讨其临床意义.方法应用流式细胞仪检测42例胃癌患者手术前后外周血中T细胞2种表面抗原CD69、HLA-DR,并与良性病变患者进行对照.结果发现胃癌患者术前CD69细胞百分率低于对照组(P＜0.01),HLA-DR细胞百分率与对照组相近(P＞0.05).术后胃癌患者的CD69、HLA-DR细胞百分率较术前均明显增高(P＜0.01).结论胃癌患者术前免疫功能低下,术后活化T细胞明显增多,表明切除肿瘤有利于提高患者的免疫功能,增强机体的抗癌能力,故应尽量争取根治性切除肿瘤.     

吸烟对氯吡格雷抗血小板活化作用的影响

目的验证吸烟能否使冠心病患者冠状动脉介入治疗(PCI)术后近期氯吡格雷抗血小板活化的作用增强。方法入选择期行冠脉造影并成功行冠脉介入治疗(PCI)的不稳定心绞痛患者42例,分为吸烟组(22例)和非戒烟组(20例)。各组入院后均给予氯吡格雷300mg顿服,术后继续每日给予氯吡格雷75mg口服。服药前以流式细胞仪测定各组CD61、CD62p的阳性表达率;术后24、72h再次测定CD61、CD62p的阳性表达率。结果 PCI术后24h两组的CD61、CD62p表达较术前无显著变化(CD61:-1.16%±19.06%vs-0.98%±22.19%,P=0.36;CD62p:-1.93%±10.80%vs-2.07%±15.49%,P=0.96);PCI术后72h吸烟组CD61、CD62p表达较术前有下降趋势,而非吸烟组无下降趋势(CD61:-2.19%±21.72%vs 5.27%±26.58%,P=0.46;CD62p:-6.13%±18.74%vs 0.12%±12.78%,P=0.25),但是这些差异无统计学意义。结论吸烟未增强冠心病患者PCI术后近期氯吡格雷的抗血小板活化作用。本实验未能验证吸烟能增强冠心病患者PCI术后近期氯吡格雷的抗血小板活化作用这一结论。     

融合表达IL-18BP和IL-4的重组腺病毒治疗对胶原诱导型关节炎小鼠血清IL-18表达的作用

目的:构建小鼠IL-18BP和IL-4融合表达的重组腺病毒载体(Ad mIL-18BP/mIL-4),对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠进行局部关节基因治疗,观察小鼠血清IL-18表达水平。方法:采用雄性DBA-1/BOM小鼠,建立胶原诱导关节炎的小鼠模型。将融合表达小鼠IL-18BP和IL-4的重组腺病毒载体进行局部关节腔内注射后1、2、4周,采用酶链免疫吸附检测方法(ELISA),检测血清IL-18水平。同时设AdLacZ病毒对照组和PBS组织对照组。结果:CIA小鼠关节腔注射AdmIL-18BP/mIL-4后第1、2、4周,AdmIL-18BP/mIL-4治疗组的血清IL-18平均浓度分别为(36.5±5.4)ng/L、(32.5±3.2)ng/L、(28.7±2.9)ng/L,明显低于相应时间点AdLacZ对照组[(66.2±5.1)ng/L、(69.2±4.2)ng/L、(77.7±3.9)ng/L]和PBS对照组的水平[(67.3±7.1)ng/L、(71.9±1.8)ng/L、(78.7±4.1)ng/L],P均<0.01。但治疗组血清IL-1...     

线粒体4977-bp缺失对鼻咽癌的影响

目的分析线粒体4977-bp缺失对鼻咽癌（NPC）的影响,探讨NPC发病的可能分子机制。方法收集2019年1至12月杭州市第一人民医院手术的NPC患者66例,使用荧光定量PCR检测癌组织中线粒体4977-bp缺失,同时对携带该缺失的患者进行线粒体功能研究,包括活性氧（ROS）水平、ATP水平、线粒体DNA（mtDNA）拷贝数等。结果66例NPC患者中发现2例患者携带线粒体4977-bp缺失,与性别、年龄相仿的2例健康体检者相比,mtDNA拷贝数和ROS水平升高,而ATP水平降低。结论线粒体4977-bp缺失可能影响线粒体ATP、mtDNA拷贝数以及ROS水平,引起线粒体功能损伤,进而参与了NPC的发病进程。     

特应性皮炎患者外周血辅助性T细胞17与白介素17的检测

目的 探讨特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）患者外周血白介素17蛋白和mRNA水平及辅助性T细胞17（Th17）表达及其意义。方法 用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测63例AD患者及30例正常人对照血浆中IL-17蛋白水平。实时荧光定量RT-PCR检测两组外周血中IL-17 mRNA表达水平。流式细胞仪检测AD患者和对照者外周血单一核细胞中Thl7细胞的比例。分析外周血Th17细胞比例和IL-17水平与AD患者病情严重度的相关性。结果 急性期AD患者外周血中Th17细胞比例为1.83% ± 0.47%,明显高于正常人对照组（0.85％ ± 0.45％,t = 4.128,P < 0.01）和慢性期组（1.12% ± 0.69%,t = 2.439,P < 0.05）。AD组外周血中血浆IL-17水平为98.37 ng/L,高于正常人组63.75 ng/L,U = 168,P < 0.05。AD组外周血IL-17mRNA表达水平高于正常人对照组。AD患者外周血Th17细胞比例和血IL-17蛋白水平与湿疹面积及严重度指数（EASI）积分均呈显著正相关（r = 0.68l,P < 0.01;r = 0.427,P < 0.05）。结论　急性期AD患者外周血Th17细胞比例显著升高, IL-17蛋白分泌及基因表达水平存在异常,与病情严重度明显相关,提示IL-17和Th17细胞可能在AD发病中起作用。