慢性乙肝患者血清细胞因子、乙肝病毒与肝纤维化的关系

目的：探讨慢性乙肝患血清细胞因子（TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8），乙肝病毒（HBV）对肝纤维化（HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN）的影响作用。方法：采用ELISA和RIA方法检测171例慢性乙肝患血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8，HLA，PCǚ，C-Ⅳ，LN的水平，HBV－DNA定量检测采用PCR方法。结果：慢性乙肝患血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8，HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN的含量均不同程度高于对照组，且随肝损害程度的加重而升高，与肝损害程度呈正相关关系（P＜0．05或P＜0．01）；须血清TGF－β1水平与血清HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN水平具有直线相关关系。HBV－DNA阳性组（Ⅱ组）均高于HBV－DNA阴性组（I组），且在慢性中，重度肝炎间差异显（P＜0．05）。结论：血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8参与慢性乙肝的发病机制及肝纤维化的形成，且与病毒复制的活跃程度相关。     

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

目的：研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法：构建用于研究Syk和G1ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统，验证G1ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果：哺乳动物细胞双杂交分析证实G1ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用；而突变体分析表明，这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论：HTNVG1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。     

重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc对HBV preS2S DNA疫苗免疫作用的影响

目的 探讨IL-2/Fc融合表达后对HBVpreS2S基因疫苗诱导免疫反应的佐剂效应.方法 采用HBV preS2S DNA疫苗作为基础免疫,重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂加强免疫BALB/c小鼠,采用0、2、4周的方案接种,检测各次接种后抗体水平.初次免疫后7周,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子的分泌水平.结果 pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂在HBV preS2S注射3 d后免疫组小鼠抗体滴度、免疫脾细胞的杀伤活性和增殖活性、TH1型细胞因子的分泌水平,均比各对照组明显增强.结论 IL-2/Fc是有效的HBV preS2S DNA疫苗佐剂之一.     

汉滩病毒S片段基因cDNA 3′端非编码区对核蛋白在大肠杆菌中表达的影响

为了探讨汉滩病毒Ｓ片段ｃＤＮＡ３′端非编码区基因对核蛋白表达的影响，先后构建了两个核蛋白的表达质粒（ｐＢＶＳ２２和ｐＢＶＳＸ），其中ｐＢＶＳ２２不含非编码区基因，ｐＢＶＳＸ含有３′端非编码区基因。比较两者在大肠杆菌中表达核蛋白的水平后发现３′端非编码区对核蛋白的表达有明显的负调控作用，表达量下降近５０％。可能的原因是非编码区中含有非常丰富的ＡＴ碱基。该研究结果为进一步提高汉滩病毒核蛋白的表达量积累了经验，也为高效表达其它病毒结构蛋白提供了有益的资料。     

慢性HBV感染者外周血CD4+CD25high调节性T细胞初步分析

目的 分析不同临床乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的水平及其与各种临床指标的关系.方法 采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者(HBsAb+组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例)及12例健康成人外周血标本,流式细胞仪分析外周血中CD4+CD25high Treg含量,ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,RT-PCR法检测HBV DNA载量,同时进行肝脏生化功能检测,并进行统计学分析.结果 HBV慢性感染者[(12.35±6.48)个/μl;(1.82 4-0.87)%)]及健康成人外周血标本[(8.91±3.11)个/μl,(1.35±0.39)%]中CD4+CD25highTreg绝对计数和其占CD4+T细胞百分含量差异均无统计学意义(P＞0.05);分组分析发现,免疫耐受期组CD4+CD25highTreg占CD4T细胞百分含量高于HBsAb+组、活动肝炎组及健康对照组(P＜0.05);免疫耐受期组CD4+CD25highTreg绝对计数高于健康对照组(P＜0.05);余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).分析CD4+CD25highTreg含量与临床指标间相关性发现,CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈负相关(r=-0.418,P=0.038),与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.344,P=0.021),与HBV DNA水平无相关性(r=0.118,P＞0.05);CD4+CD25highTreg绝对计数与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.360,P=0.015),与ALT水平及HBV DNA水平无相关性(r=-0.211,r=-0.060,P＞0.05).结论 CD4+CD25highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用.     

Phenotypic Knockout of HIV-1 Chemokine Coreceptor CXCR4 and CCR5 by Intrakines for Blocking HIV-1 Infection

To investigate the phenotypic knockout of HIV-1 chemokine coreceptor CXCR4 and CCR5 by intrakines and its inhibitory effect on HIV-1 infection. Primary human PBLs were transduced with the recombinant vector pLNCX-R-K-S-K(△NGFR), followed by anti-NGFR/anti-IgG-magnetic bead method selection and FCM detection. The transduced PBLs were infected with DP1 HIV-1 virus thereafter envelope-mediated syncytium formation and p24 detection were carried out to study the blockage of HIV-1 infection by co-inactivation of CCR5 and CXCR4. pLNCX-R-K-S-K (△NGFR)-transduced PBILs were isolated with an anti-NGFR/anti-IgG-magnetic bead method. After isolation, about 70% of the PBLs were positive for the NGFR marker. When the transduced PBLs were infected with DP1 HIV-1 virus, envelop-mediated syncytium formation was almost completely inhibited by pLNCX-R-K-S-K(△NGFR) transfection. Also, p24 antigen was very low in the cultures of pLNCX-R-K-S-K (△NGFR) transduced PBLs. pLNCX-R-K-S-K(△NGFR) transduction inhibited the production of DP1 p24 antigen by 15%, 43% and 19% on days 4, 7 and 10 respectively. The lymphocytes with the phenotypic knockout of CCR5 and CXCR4 could protect primary human PBLs from DP1 HIV-1 virus infection.     

肺隐球菌病并隐球菌脑膜炎1例分析

患者男，38岁，以乙肝标志物阳性13年、发热20d、伴腹胀及皮肤黄染1周于2006年4月3日入院。患者于1983年发现HBsAg、HBeAg、抗-HBe阳性，1998年以后出现转氨酶反复升高现象，2002年出现腹水，诊断为肝硬化，间断保肝治疗。2006年3月上旬受凉后出现发热，体温38．0℃，伴流涕、咳嗽、咯白痰，头孢哌酮治疗效果不佳，体温波动于37．5—38．5℃，3月27日起体温高达39．0℃，腹胀渐明显，并出现面黄、眼黄，胸部X线片提示肺部感染，血常规WBC7×10^9／L，Hb137以，PLT22×10^9／L，中性粒细胞0．81，丙氨酸氨基转移酶（ALT）223U／L，总胆红素（TBIL）80μmol／L，     

用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNV G1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST- ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1 ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF (Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1 ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白, 为进一步探讨HTNV G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.     

PCR测肝硬化腹水中细菌DNA的研究

目的探讨用PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性,了解肝硬化患者发生细菌移位的高危因素。方法在细菌16S rRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBV-DNA、37份肝硬化患者腹水进行PCR扩增。腹水中细菌DNA阳性者纯化后经核苷酸测序鉴别细菌种类,同时收集患者临床资料,运用SPSS11.5软件对患者基本临床特征及主要检验结果进行统计分析。结果7种对照菌株均得530bpDNA片段,而与人基因组DNA、HBV-DNA无交叉阳性反应,敏感性试验可检测出1pg的细菌DNA。37份腹水中有9份获得530bp DNA片段(24.3%),而腹水细菌培养阳性率为5.4%(2/37),二者比较有显著性差异(P<0.05)。腹水中细菌DNA阳性和阴性的两组肝硬化患者在上消化道出血的发生率、血清总胆红素水平、凝血酶原活动度、Child-Pugh积分、腹水总蛋白浓度、外周血白细胞总数等比较,有显著性差异(P<0.05)。结论用通用引物通过PCR方法扩增细菌16S rRNA基因具有高度敏感性、特异性,可应用于肝硬化患者腹水中细菌DNA的检测及细菌移位的研究。肝功能损害、腹水调理活性低下和上消化道出血是肝硬化患者发生细菌移位的高危因素。