新疆出血热病毒核蛋白基因的高效表达及其在诊断中的初步应用

目的　克隆并测定了克里米亚 刚果出血热病毒 (CCHFV)中国分离株 (新疆出血热病毒 ,XHFV)BA8816 6株核蛋白 (NP)基因的序列并实现其在细菌中的高效表达与临床诊断的应用。方法　病毒RNA经RT PCR扩增出完整的NP基因。将扩增产物进行序列分析并克隆至融合表达载体pET32a ,使重组质粒在大肠杆菌BL 2 1中高效表达。将融合蛋白经初步纯化后包被ELISA板用于抗体检测。结果　XHFVBA8816 6株NP基因序列以及推导的氨基酸序列与其它XHFV的NP基因和蛋白序列同源性较高 ,在进化树上形成独立的分支。BA8816 6株NP基因编码 4 82个氨基酸的核蛋白 ,推测的相对分子质量 (Mr)约为 5 4× 10 3。在细菌中表达的融合蛋白经印迹试验证明具有良好的抗原性。以所建立的ELISA方法检测疫区人和动物血清的结果与IFA一致 ,并与临床诊断有很好的符合率。结论　BA8816 6株与其它XHFVBA6 6 0 19、BA84 0 2的NP基因在进化上关系密切 ,综合M基因的序列分析结果 ,人源分离株BA8816 6可能是来自蜱的BA84 0 2变异株。表达于细菌中的核蛋白可作为安全的诊断性抗原用于临床检测及流行病学调查 ,所建立的方法准确、特异、简便、快速     

汉滩病毒S片段基因cDNA 3′端非编码区对核蛋白在大肠杆菌中表达的影响

为了探讨汉滩病毒Ｓ片段ｃＤＮＡ３′端非编码区基因对核蛋白表达的影响，先后构建了两个核蛋白的表达质粒（ｐＢＶＳ２２和ｐＢＶＳＸ），其中ｐＢＶＳ２２不含非编码区基因，ｐＢＶＳＸ含有３′端非编码区基因。比较两者在大肠杆菌中表达核蛋白的水平后发现３′端非编码区对核蛋白的表达有明显的负调控作用，表达量下降近５０％。可能的原因是非编码区中含有非常丰富的ＡＴ碱基。该研究结果为进一步提高汉滩病毒核蛋白的表达量积累了经验，也为高效表达其它病毒结构蛋白提供了有益的资料。     

流行性出血热病毒传代细胞双价纯化疫苗研究

目的 我国的流行性出血热主要由汉滩型（HTN）和汉城型（SEO）病毒引起,疫苗的免疫接种是控制和预防本病发生的关键之举。现有的疫苗虽有较好的近期防病效果,但副反应多、抗体水平低,而且由于在量的动物种群以提供原代细胞的来源,造成环境污染而疫苗质量又难以控制。本专题的主要研究内容和目的就是用Vero细胞作为生产疫苗的基质,同时用现代较先进的浓缩纯化技术和检测手段,研制成精制双价疫苗。方法 两型病毒分别在Vero细胞传代适应至高滴度,大量培养收获上清作为疫苗原液,采用超滤技术浓缩50－100倍,然后通过Sepharose4FF 柱纯化。认真测定抗原和蛋白含量、牛血清含量、细胞DNA含量及必要的试验,精心配制成Vero双价疫苗。结果 按我国“生物制品规程”和出血热灭活疫苗临床试验最低标准进行全面系统鉴定,完全符合质量要求。正待批准进行人体临床试验。结论 本品有可能作为现有疫苗的替代品。     

膜蛋白Fas及其配体FasL系统与病毒感染

近年来的研究发现Ｆａｓ/ＦａｓＬ(ＣＤ95 /ＣＤ95Ｌ)的相互作用是启动哺乳动物细胞进入编程死亡 (ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ ,ＰＣＤ)的一个重要的主导途径。因其不仅参与体内的免疫优先 (ｉｍ ｍｕｎｅｐｒｉｖｉｌｅｇｅ)、克隆选择、上、下调免疫反应等许多重要的生理过程 ,而且还与很多病理反应密切相关 ,因而倍受关注[1 3] 。本文综述Ｆａｓ/ＦａｓＬ系统的结构功能及在病毒感染中的作用。1　Ｆａｓ/ＦａｓＬ系统概述1989年 ,两个研究小组独立地鉴定出可以诱导细胞凋亡的新型膜蛋白—Ｆａｓ(又称ＡＰＯ 1,分子编码ＣＤ9…     

肾综合征出血热病毒76－118株的反转录及聚合酶链反应扩增、鉴定的初步研究

用反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）７６－１１８株ＭＲＮＡ３＇－端２３７ｂｐ基因片段。制备了长臂光敏氨基已酸生物素标记的２３７ｂｐ探针。经琼脂糖电泳和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，生物素－亲和素系统杂交和显色，对２３７ｂｐ扩增产物进行了特异性和灵敏性鉴定。ＰＣＲ技术与反转录技术相结合可用来对一些ＲＮＡ病毒进行研究和诊断，并能快速制备出质量较好的标记探针。     

汉坦病毒感染的血清学分型研究进展

汉坦病毒(HV)属布尼亚病毒科(Bunyaviridae)汉坦病毒属(Hantavirus),为分节段的单股负链RNA病毒,病毒基因组有3个片段组成,大(L)片段(6.5kb)编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶,中(M)片段(3.6kb)编码病毒糖蛋白G1和G2的前体糖蛋白,小(S)(1.7～2.0kb)编码病毒的核衣壳蛋白(NP)[1].     

间接ELISA法的改进并用于肾综合征出血热病人血清的初步分型

采用超声、差速离心法制备肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原。通过与免疫荧光法（ＩＦＡ）和捕获ＩｇＭＥＬＩＳＡ法（ＭａｃＥＬＩＳＡ）比较，分析了病人临床四个期血清抗体阳性率，对３组不同地区的正常人群ＨＦＲＳＶ抗体阳性血清作抑制试验，以及比较ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ血清抗体几何平均滴度证实本方法是特异和灵敏的。用这一方法对野鼠型和家鼠型ＨＦＲＳ病人血清，与两型病毒作交叉ＥＬＩＳＡ试验，结果呈单向反应；采用胞膜荧光反应为主的感染细胞制备抗原，可提高其分型效果。     

关于肾综合征出血热──肾综合征出血热疫苗研究进展

关于肾综合征出血热──肾综合征出血热疫苗研究进展中国预防医学科学院病毒学研究所（北京１０００５２）杭长寿肾综合征出血热（简称出血热）是危害我国人民身体健康最严重的病毒性传染病之一。在所有预防对策中，疫苗免疫是关键之举．从１９７８年和１９８１年，国内外...     

汉滩病毒西安分离株84 FLi的S片段全基因序列测定及分析

目的：测定我国陕西西安出血热肾病综合征(HFRS)患者流产胎儿肝分离的病毒84FLi株的全S片段基因序列，了解其分子特征，并确定其在汉坦病毒(HV)种系发生中的位置。方法：采用逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)，扩增出S基因的cDNA，直接用PCR产物或克隆入pMD18-T载体中测序。结果：84FLi株的全S基因共由1688个核苷酸组成，四种核苷酸的比例分别为A31．39％、C19．25％、G23．04％和T26．30％，GC含量为42．29％，AT含量为57．71％。最大开放读码框为37～1326，共编码429个氨基酸。核苷酸序列同源性分析表明，84FLi株与汉滩病毒(HTN)型同源性高于与其他型HTV的同源性。84FLi株与中国毒株Chen4和RG9同属于一个进化分支，而与HTN型国外毒株距离较远，属于不同的进化分支。结论：84FLi株属于HTN，并与国内分离的HTN同源性较高。