甲硫腺苷磷酸化酶在非小细胞肺癌中转录表达

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)及其连锁基因p14，p15和p16在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况。方法 采用RT-PCR方法检测15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAP及其边锁基因p14、p15和p16mRNA的表达情况。结果 MTAP在73．3％的肿瘤标本中不表达或转录水平降低5倍以上，而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达93．3％；此外，MTAP在肺腺癌和鳞癌中的低表达现象无显著性差异，但在中／低分化肺癌中低表在显著高于高于分化癌。对7例标本分析表明，1例P15基因在正常组织及癌瘤中都高水平表达，1例均不表达。5例在癌标本中基本不表达．而在正常组织中表达；而p14和p16正常组织中转录表达水平很低，而在配对的7例肺癌组织中却分别有3项高表达。结论 MTPA基因低表达或丢失可能与肺癌的恶性程度密切相关，MTAP的缺失可能独立于p16之外，提示MTAP的低表达或缺失在肿瘤生物学中有其功基础的基础。     

分析结核病耐喹诺酮(gyrA)基因变化的规律

目的研究结核分枝杆菌gyrA基因突变的规律。方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性（（PCR-SS-CP）技术鉴定156株临床分离株，确定为结核分枝杆菌的菌种，并进一步分析gyrA基因突变的情况。结果以结核分枝杆菌标准株为对照，147株临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。29株药物敏感株的gyrA基因SSCP图谱泳动均无异常；59株耐喹诺酮类药临床分离株中30株异常，占50．8％。结论结核分枝杆菌耐药与gyrA基因突变有关，且在药敏实验高、低浓度区均可发生。     

16S～23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针不同显色方法对结核患者痰标本的检测

目的：评价16S－23rDNA间隔区序列寡核苷酸探针碱性磷酸酶显色与辣根过氧化物酶化学发光学对结核患者痰标本检测的应用价值。方法：采用生物素标记5′端18bp的寡核苷酸探针斑点杂交的碱性磷酸酶显色反 辣根过氧化物酶化学发光检测90例例结核患者和30例非结核患者痰标本,结果：痰标本基因组DNA直接与探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为22．2％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为33．3％,痰标本经引物PL1、PL2扩增（扩增产物350bp,）与寡核苷酸探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为77．8％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为83．3％,痰标本经引物b扩增（扩增产物250bp)与探针杂交,碱性磷酸酶显色和化学发光检测阳性率分别为75．6％,80．0％,检测的敏感性高于痰涂片。寡核苷酸探针与30例非结核患者痰标本DNA杂交则全为阴性。结论：寡核苷酸探针和250bpPCR扩增产物相结合,经化学发光显色是分枝杆菌检测的一种有效方法。     

结核分枝杆菌重组MTB48蛋白抗原血清学诊断价值的研究

目的 研究重组MTB48(recombinant MTB48,rMTB48)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂.方法 应用基因工程技术表达、纯化rMTB48蛋白,通过酶联免疫吸附试验方法检测402例血清中抗结核抗体.结果 rMTB48蛋白在大肠杆菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,分子量约57.6 kD,具有良好的抗原特异性.在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗MTB48抗体的阳性率分别为41.7%和24.3%,总的灵敏度为32.9%.在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗MTB48抗体的阳性率分别为0.0%和11.3%,总的特异性为5.7%.结论 rMTB48蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一.     

辐射诱发BEP 2 D恶性转化中Smad 7对TGF-β/SMADs信号通路的调控

目的 研究BEP2D细胞经辐射诱发恶性转化过程中，作为SMAD蛋白家族的抑制分子，Smad7对TGF-β／SMAD介导信号通路的调控。方法 用Northem blot检测TGF-β刺激之后，永生化BEP2D细胞及辐射诱发恶性转化的BERP 35T2细胞中Smad7 mRNA的表达水平。人工合成SMAD结合元件(SBE)重复序列，同报告基因碱性磷酸酶融合。构建好的载体同Smad7真核表达载体共转染，TGF-β刺激，通过报告基因的表达丰度来检测Smad7对TGF-β／SMADs介导的信号通路的调控。结果 Northern杂交结果表明，永生化细胞Smad7基因对TGF-β刺激的应答正常，恶性化细胞的应答降低。基因转染的结果表明，永生化细胞中SBE的基础活性较恶性化细胞高；TGF—β刺激之后，永生化细胞中SBE活性显著增强，恶性化细胞变化不明显；同Smad7真核表达载体共转染之后，两种细胞中SBE活性均显著降低。结论 在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7基因对TGF-β信号通路的反馈调节作用发生紊乱，使TGF-β信号通路持续处于抑制状态，TGF-β对细胞的负性调控作用减弱，细胞进一步向恶性化发展。     

rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究

目的 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌16S-23SrDNA间隔区序列进行扩增,同时加入生物素标记,制成250bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究,并对90份结核病人,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为100pg。rDNA探针与受试24种分枝杆菌和11种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交,特异性较高。而rDNA探针对90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为80.2%,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64%)。rDNA探针与30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。     

α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型的建立

目的 建立α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型。方法 α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种裸鼠皮下，后采用组织块接种的方法，在鼠间连续传代3次．计算原代成瘤率及传代成活率，并观察肿瘤的转移情况，病理切片和免疫组织化学鉴定肿瘤的性质和来源．结果 (1)α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种成瘤率为44．4％(4／9)；(2)原代肿瘤的体表转移率与肺转移率均为25％(1／4)；(3)病理切片鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌；(4)免疫组织化学显示CK3和EMA表达阳性。结论 采用组织块接种的方法，在α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4的基础上，经过裸鼠体内连续传代3次，成功地建立了人类肺癌裸鼠转移模型。     

结核分枝杆菌 PPE17蛋白原核表达与抗原性分析

目的 利用原核系统生产重组结核分枝杆菌 PPE17蛋白,Western-Blot方法鉴定PPE17蛋白的抗原性和特异性.方法 PCR 扩增 Rv1168c 基因序列然后克隆至原核表达载体pET-24b中,对PPE17蛋白进行表达和纯化,并以Western blot分析其抗原性和特异性.结果 PPE17蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,复性后的 PPE17蛋白与结核病患者阳性血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本无反应.结论 PPE17蛋白在大肠杆菌中以包涵体表达形式存在,具有抗原特异性和免疫原性,可开发为结核病临床诊断试剂.