低剂量X射线对荷瘤小鼠局部大剂量照射抑瘤作用的影响

目的：探讨低剂量全身照射对局部肿瘤大剂量照射抑瘤作用的影响。方法：采用昆明系小鼠皮下接种Ｓ１８０腹水肉瘤细胞为实验瘤模型；荷瘤小鼠局部１０Ｇｙ或２．５Ｇｙ×４次Ｘ射线照射前１２ｈ或２４ｈ接受５０，７５，１００和１５０ｍＧｙ全身照射，观察局部照后２１ｄ的肿瘤生长百分数。结果：５０，７５和１００ｍＧｙ全身照射可明显增强局部肿瘤大剂量照射的抑瘤效果；局部照前１２ｈ比２４ｈ接受低剂量照射的增强效应更明显；     

宫颈癌鼻咽部转移1例报告

正宫颈癌的转移途径主要是盆腔内浸润性扩散,并通过淋巴管向远处逐站转移。血行播散是最后也是较少见的转移途径,多发生于肿瘤晚期病变或分化差的肿瘤,较常见的远处转移部位,如肺,肝和骨骼~([1])。已报道不太常见的转移性疾病部位,包括脚趾~([2])、眼内~([3])、头皮~([4])、颅骨~([5])等远端部位。     

两种钙调素在不同孕龄小鼠子宫滋养细胞的表达及其与早孕调节的相关性

目的 检测E－钙调素和－P－钙调素在孕1－12天小鼠子宫、滋养细胞等组织的表达特点，探讨两种钙调素在哺乳动物胚胎着床和发育以及早孕调节的相关性。方法 选用清洁级昆明种属小鼠，采用免疫细胞化学SBAC法对E－钙调素及P－钙调素在1－12天孕龄小鼠子宫和滋养细胞的表达，进行定位、定量研究。结果 E－钙调素和P－钙调素广泛分布在早孕子宫肌层和内膜，但不同孕龄间的PU值差异显著（P＜0.05或＜0.01）；在胚胎组织中，孕第4天起E－钙调素的表达主要定位于细胞滋养层，自第7天起开始在合体滋养层强表达；孕1－8天内层细胞滋养层和外层合体滋养层均见P－钙调素强表达，自孕9天起表达强度降低。结论 两种钙调素在早孕小鼠子宫和胚胎组织中均呈特异性规律表达，推断钙调素与早孕胚胎发育、孕卵着床及早孕调节密切相关。     

大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究

目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体，并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求，应用在线miRNA设计工具http：//maidesigner．invitrogen．com／maiexpress／，针对大鼠TIMP1基因（GenBank：U06179）的598位点设计、合成Oligo DNA，退火形成双链DNA后，与载体pcDNA TM^6．2-GW／EmGFP-miR连接，转化Top10感受态细胞，构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后，以脂质体Lipofectimine TM^2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，24、48、72h后收集细胞，应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确；将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，48h即可见TIMP1 mRNA表达量下降，72h检测不到TIMP1 mRNA的表达，而未转染组及转染pLacZ-miR／GFP（阴性对照）组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR—NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR／GFP；pTIMP1-miR／GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默，为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。     

慢病毒载体介导的基因转导技术对人脐血CD34+细胞基因表达谱的影响

目的 研究慢病毒载体(lentivirus vector)基凶转导技术对脐血CD34+细胞基因表达的影响.方法 将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的第三代自身失活(self-inactivating,SIN)慢病毒载体导入CD34+细胞,提取被病毒感染细胞的总RNA,应用cDNA微阵列技术对慢病毒载体感染的脐血CD34+细胞及正常对照细胞进行差异基因表达谱分析.结果 在23000个被检测基因中,与无基因导人的对照组细胞比较,基因导入细胞中表达的上调基因共2个,分别为IGSF4和HEC基因,下调基因共6个,分别为HNRPAO、ZNF205、FLNA、CLK3、LDB1、ACTA1.进一步对筛选出的差异表达基因进行半定量RT-PCR分析证实基因表达水平变化不明显.结论 本实验中应用的慢病毒载体对脐血CD34+细胞基凶表达无明显影响,有望成为临床基因治疗有效且安全的工具.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化模型的修复作用

目的：观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对大鼠肝纤维化模型的修复作用,为MSCs的临床应用提供可靠的理论依据。方法：分离、纯化大鼠MSCs并进行体外培养。用皮下多点注射CCl4制备肝纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为3组：正常对照组、模型损伤组和MSCs移植组,每组6只。将MSCs经尾静脉回输到MSCs移植组大鼠体内,30 d取肝脏,观察病理变化,免疫组织化学检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果：流式细胞术检测体外分离培养的MSCs 93.27%处于G0/G1期,且MSCs表面CD44呈阳性表达;将分离的MSCs输入肝纤维化模型大鼠30 d 后,镜下可见MSCs移植组病理改变较模型损伤组明显减轻,肝小叶结构基本正常,肝血窦基本正常,纤维结缔组织无明显增生;α-SMA染色强度MSCs移植组低于模型损伤组。结论：MSCs在一定程度上可以促进纤维化肝组织的修复。     

小鼠骨髓来源的树突状细胞体外诱导分化的实验研究

目的　研究小鼠骨髓树突状细胞体外诱导分化、成熟及对T细胞增殖的影响 ,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤治疗的应用提供技术方法。方法　应用IL 4、GM CSF培养小鼠骨髓细胞 5～ 7d ,镜下观察细胞形态学变化 ;培养至第 5～ 6d ,加入黑色素瘤 (B16 )冻融抗原继续培养 1～ 2d ,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86 ,并与同种异体T细胞混合培养 72h ,终止培养前 16h加入 3H TdR(0 .5 μCi 孔 ) ,γ 液体闪烁仪测定cpm值。 结果　IL 4、GM CSF培养 3d可见细胞形态发生改变 ,细胞形状不规则 ,培养 5～ 6d时 ,有刺状突起、拉长 ,为典型树突状细胞形态学特征 ;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达 ,IL 4 +GM CSF +TNF α组 (6 1.6 8% ,71.2 5 % )及IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组 (6 3.11% ,76 .88% )明显高于对照组 (2 .4 1% ,3.88% )及单纯IL - 4 +GM -CSF培养组 (2 1.86 % ,2 8.6 9% ) (P <0 .0 0 1) ,IL - 4 +GM -CSF +TNF -α组与IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组比较CD83、CD86表达没有显著性差异 ;液闪仪检测结果显示 ,IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组 ,且有显著性差异(P <0 .0 0 1,P <0 .0 5 )。结论　小鼠骨髓细胞体外培养可以成功诱导扩增出足够量树突状细胞     

间充质干细胞对辐射诱发胸腺瘤β-catenin和c-myc基因影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对辐射诱发胸腺瘤过程中β-catenin和c-myc mRNA表达影响,为阐明MSCs在肿瘤发生发展中作用提供理论依据。方法全骨髓贴壁培养C57BL/6小鼠MSCs,X射线照射C57BL/6小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,将小鼠随机分成对照组、辐射组及MSCs组,每组6只;逆转录-聚合酶链反应技术检测各组小鼠胸腺β-catenin和c-myc mRNA表达。结果辐射组小鼠胸腺瘤β-catenin mRNA表达量(0.92±0.23)明显高于对照组(0.64±0.21)(P<0.05),MSCs组β-catenin mRNA表达量(0.77±0.24)下降;与对照组(1.48±0.34)比较,辐射组c-myc mRNA表达量(1.61±0.37)上调,MSCs组c-myc mRNA表达量(1.18±0.34)明显低于辐射组(P<0.05)。结论 MSCs可通过抑制β-catenin和c-myc基因异常表达,抑制肿瘤的增殖。     

移植后的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化的实验研究

目的观察Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植后在脊髓损伤区是否向神经元分化。方法首先用BrdU在体外标记BMSCs,将标记后的BMSCs分别由大鼠尾静脉及脊髓损伤局部移植到大鼠体内,于移植后10天、20天及30天灌杀大鼠,制作脊髓的冰冻切片并行免疫组织化学染色,在激光共聚焦显微镜下观察植入的BMSCs表达神经元特异性蛋白NSE的情况。结果移植术后10天2、0天及30天,损伤脊髓内可见BrdU/NSE双标记的细胞。结论 BMSCs移植后在脊髓损伤区内可见神经元特异性蛋白NSE,移植的BMSCs可能分化为神经元。     

Racl shRNA对卵巢癌细胞株Skov3生物学行为的影响

目的 为Racl shRNA治疗卵巢癌提供实验依据.方法 Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524以LipofectimineTM2000介导转染卵巢癌细胞株Skov3,Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力,Western印迹分析转染细胞MMP2蛋白的表达情况.结果 转染Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524组、转染非特异shRNA载体pGPU6/GFP/NC组和未转染组迁移到滤膜底面的细胞数分别为97±21、319±75、365±92.而侵袭到滤膜底面的细胞数分别为79±22、285±63、324±84,转染Racl shRNA载体组与转染pGPU6/GFP/NC组、未转染组比较差异显著(P<0.05),转染pGPU6/GFP/NC组与未转染组相比无统计学意义(P>0.05).转染Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524组MMP2蛋白的表达量下降.结论 Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524可有效抑制卵巢癌细胞Skov3的迁移和侵袭,该抑制作用可能是通过调控MMP2的表达而实现的.