耐药性癫(癎)患者颞叶中细胞周期依赖性蛋白激酶5的表达

目的 研究细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinases 5,CDK5)在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,探索其在耐药性癫(癎)发病机制中的作用.方法 收集耐药性癫(癎)患者术后脑组织,用荧光定量PCR、免疫组化和Western blot 3种检测方法从基因和蛋白水平分别测定CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,并与对照组进行比较.结果 荧光定量PCR发现CDK5 mRAN比对照组明显增加,免疫组化检测显示这种基因的蛋白表达产物主要分布在神经元轴突和胶质细胞中,Western blot检测在相对分子质量35 000处有一蛋白条带,并且可见实验组(颞叶和海马中分别为1.4293±0.1839和2.0733±0.4738)高于对照组(颞叶和海马中分别为0.9680±0.4147和1.403±0.6163,P＜0.05).结论 CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中表达增强,提示他们可能参与了耐药性癫(癎)的形成.     

小脑变性相关蛋白2 mRNA在癫痫患者脑组织中的表达及其临床意义

目的了解小脑变性相关蛋白2(CDR2)mRNA在癫痫(EP)患者脑组织中的表达及其临床意义。方法将48例EP患者分成耐药(40例)和非耐药(8例)两组,用基因芯片扫描和FQ-PCR分别检测脑组织中CDR2基因表达,并与对照组比较。结果基因芯片扫描提示CDR2 mRNA在EP患者与对照组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR结果与基因芯片扫描一致。结论EP患者脑组织中有CDR2 mRNA表达,由于其表达产物可通过血-脑脊液屏障进入脑脊液(CSF)和血液中,因而检测CDR2 mRNA在血或CSF中的表达产物有可能成为诊断EP的一个重要指标。     

耐药性癫患者脑组织线粒体mMDHNDUFC_2基因表达异常

目的研究耐药性癫患者脑细胞线粒体mMDH、NDUFC2表达,探讨其在耐药性癫癎形成中的作用。方法分别提取48例耐药性癫癎患者、8例非耐药性癫患者及8例对照组脑组织标本的总RNA后,用基因芯片对其进行扫描,随后用荧光定量PCR技术进行验证。结果发现与线粒体功能有关的基因mMDH、NDUFC2在耐药性癫癎中显著下调,荧光定量RT—PCR验证结果与基因芯片一致。结论脑细胞线粒体基因mMDH、NDUFC2表达异常可能通过能量代谢及神经元坏死参与了耐药性癫癎的形成。     

糖原合成酶激酶-3β及其磷酸化产物在难治性癫(癎)患者颞叶前部的表达

目的 探讨糖原合成酶激酶-β(CSK-3β)及其磷酸化产物(p-GSK-β)在难治性癫(癎)(RE)患者颞叶前部的表达.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量(FQ)PCR、免疫组化及免疫印迹法检测36例RE患者颞叶前部GSK-3β及其p-GSK-3β的mRNA和蛋白的表达,并与8例对照者进行比较.结果 RE患者脑内神经元及胶质细胞GSK-3β mRNA及蛋白表达明显增多(均P<0.05),p-GSK-3β表达明显减少(P<0.05).结论 GSK-3β及其磷酸化产物表达异常,可能与RE的发生和发展有关.     

糖原合成酶激酶-3β及其磷酸化产物在难治性癫痫患者颞叶前部的表达

目的探讨糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及其磷酸化产物（p-GSK-3β）在难治性癫痫（RE）患者颞叶前部的表达。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、实时荧光定量（FQ）PCR、免疫组化及免疫印迹法检测36例RE患者颞叶前部GSK-3β及其p-GSK-3β的mRNA和蛋白的表达,并与8例对照者进行比较。结果RE患者脑内神经元及胶质细胞GSK-3β mRNA及蛋白表达明显增多（均P〈0.05）,p-GSK-3β表达明显减少（P〈0.05）。结论GSK-3β及其磷酸化产物表达异常,可能与RE的发生和发展有关。     

耐药性颞叶癫痫脑组织中隆纹菌素的表达及临床意义

目的 研究耐药性颞叶癫痫患者脑组织中隆纹菌素(STRN)的表达,探讨其在耐药性颞叶癫痫发病中的意义.方法 从重庆医科大学附属第一医院神经内科建立的耐药性癫痫患者脑组织库中随机抽取42例耐药性颞叶癫痫患者术后脑组织.采用基因芯片检测STRN eDNA的表达,以Cy3-dCTP标记对照组cDNA,以Cy5-dCTP标记实验组eDNA,收集荧光信号,Cy5/Cy3*(Cy3*为校正后的Cy3信号值)小于0.5或大于2.0提示基因mRNA有表达差异.采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting检测STRN的蛋白表达,并与对照组(12例,均为行手术减压或清创患者的颞叶脑组织)进行比较.结果 耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中编码STRN的基因出现低表达(Cy5/Cy3*值为0.384).STRN蛋白在耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中的表达量与对照组相同部位比较明显降低:免疫组化显示实验组光密度值(0.310 8±0.108 7)明显低于对照组(0.421 04±0.120 2,P<0.05);免疫荧光检测亦显示实验组光密度值(0.026 04±0.023 2)明显低于对照组(0.050 6±0.001 1,P<0.05);Western blotting检测显示实验组STRN蛋白表达(光密度值0.591 4±0.219 7)明显低于对照组(0.980 4±0.140 1,P<0.05).结论 耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中STRN表达明显降低.STRN表达降低及其引发的雌激素信号转导、内源性一氧化氮合成减弱在耐药性颢叶癫痫发病中可能有重要作用.     

耐药性癫(癎)患者脑组织中热休克蛋白27相关蛋白1的表达

目的研究热休克蛋白27相关蛋白1(heat shock 27 000 associated protein 1,HSPBAP1, GenBank:AK096705)在耐药性癫痫患者脑组织中的表达,探讨其在耐药性癫痫发病机制中的作用。方法从重庆医科大学附属第一医院神经内科建立的耐药性癫痫脑库中随机抽取36例耐药性癫痫患者术后脑组织,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组化法对HSPBAP1的表达进行检测,并与8例对照进行比较。结果耐药性癫痫患者脑组织中HSPBAP1 mRNA的相对表达量是对照组的34．11倍;HSPBAP1蛋白在耐药性癫痫患者颞叶(0．0507±0．0003,P<0．01)和海马(0．0488±0．0196,P<0．05)中的表达量,与对照组相同部位比较明显增加。结论耐药性癫痫患者脑组织中HSPBAP1表达增高,能抑制热休克蛋白27(HSP27)的神经元保护作用,可能是导致神经元凋亡及海马苔藓纤维发芽的一个重要原因。     

难治性癫痫患者脑组织中Eml 5mRNA表达及其意义

目的 运用基因芯片和荧光定量PCR技术检测难治性癫痫患者脑组织中Eml5（EMAP like protein5，Eml5）mRNA表达，探讨其表达异常在难治性癫痫患者中的意义。方法 收集36例难治性癫痫患者和8例非难治性癫痫患者术后脑组织，用含有14109条人类基因的芯片对其扫描，筛选出目的基因后，用荧光定量PCR对芯片扫描结果进行验证，并与8例正常脑组织进行比较。结果 发现候选基因End5mRNA在难治性癫痫患者脑部海马和颞叶中出现高表达，荧光定量PCR结果与芯片结果一致。结论 End5mRNA表达上调可能是难治性癫痫发生发展中的一个重要因素，其可能通过加强神经微管组装，促进神经元轴突延伸，触发海马齿状回颗粒细胞苔藓纤维异常发芽，参与了病理性神经网络重组和兴奋性突触重构。     

HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中高表达

目的利用cDNA芯片和荧光定量PCR（Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction，FQ—PCR）技术检测难治性癫痫患者脑组织中HSPA12A（heat shock 70kDa protein 12A，HSPA12A）mRNA的表达，并探讨其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法收集36例难治性癫痫患者术后脑组织和8例正常对照组，用含有4096条人类靶基因的cDNA芯片进行扫描，筛选出候选基因后，用FQ—PCR，以3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）为内参对芯片扫描结果进行验证。结果发现候选基因HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中表达上调，FQ—PCR与cDNA芯片结果一致。结论虽然HSPA12A具体生物功能尚不明确，但我们认为HSPA12A可能作为重要的调节因子参与了神经元凋亡等分子事件。HSPA12A mRNA表达上调可能在难治性癫痫发病机制中起一定作用。     

高敏C反应蛋白水平和颈动脉内膜-中层厚度在动脉粥样硬化性脑梗死合并2型糖尿病患者中的意义

目的探讨高敏C反应蛋白水平和颈动脉内膜-中层厚度在动脉粥样硬化性脑梗死合并2型糖尿病患者中的临床意义。方法回顾分析2013-10—2014-12在我院神经内科就诊的发病72h以内的122例脑梗死患者的临床资料。根据既往是否有2型糖尿病分为糖尿病组及非糖尿病组,应用颈动脉超声检测颈动脉内膜-中层厚度(carotid intima-media thickness,CIMT),入院时同时检测患者高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)及糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)水平。了解CIMT和hs-CRP水平在急性脑梗死合并2型糖尿病患者中的变化,探讨hs-CRP与FBG及HbA1c之间的相关性。结果急性脑梗死合并糖尿病组CIMT和hs-CRP水平均明显高于非糖尿病组,差异有统计学意义(P0.05);急性脑梗死患者FBG与血清hs-CRP水平呈正相关(r=0.479,P0.000 1),HbA1c与血清hs-CRP水平呈正相关(r=0.410,P0.000 1)。结论 CIMT和hs-CRP均可以预测2型糖尿病对脑梗死患者动脉粥样硬化的损害程度。