应用CRISPR/Cas13a快速鉴定布鲁氏菌

目的 建立一种基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌鉴定方法。方法 以布鲁氏菌BCSP31基因的保守区为靶标区域设计特异的引物和crRNA,建立鉴定布鲁氏菌的CRISPR/Cas13a方法。通过对纯菌株以及临床需氧血培养阳性菌液检测评价该方法的特异性和敏感性;通过梯度稀释法评估其检测下限。结果 建立了基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌快速鉴定方法,其检测下限可达10 fg/μL。通过鉴定64株布鲁氏菌、56株非布鲁氏菌、人DNA以及57例临床需氧血培养阳性菌液,计算该方法的敏感性、特异性可达100%。结论 建立了一种基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌鉴定方法,可用于临床需氧血培养阳性后快速鉴定布鲁氏菌。     

艰难梭菌在腹泻患者中感染情况的调查

目的:通过检测腹泻患者粪便中的艰难梭菌A&B毒素(CDAB),了解某院腹泻患者艰难梭菌的感染情况。方法:收集该院2013年7-12月腹泻患者粪便标本137份。首先筛查最常见的腹泻病原菌——沙门菌,再检测CDAB,然后再对CDAB阳性患者的流行病学信息进行分析,同时利用改良的方法进行厌氧培养。结果:排除7例检出沙门菌的标本,对剩余的130例粪便标本利用酶联荧光免疫分析技术检测CDAB,共检出8例阳性,阳性率为6.15%。按科室分布分析,2例来自消化科,2例血液科,2例来自儿科门诊,1例来自肾内科,1例来自器官移植科。按年龄段分布分析,3例来自儿童,3例中青年,2例老年人。厌氧培养结果显示8例毒素阳性的标本中有6例培养出艰难梭菌,2例未检测到艰难梭菌。结论 :艰难梭菌感染易感人群正在发生变化,酶联免疫荧光技术检测CDAB素简单、快速,适合对腹泻患者进行艰难梭菌感染的筛查。     

神经外科重症监护室白色念珠菌基因分型和耐药性研究

目的 分析神经外科重症监护室白色念珠菌的药物敏感情况并建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法 监测医院感染. 方法 收集自2007年5月至11月从珠江医院神经外科重症监护室内分离的30株白色念珠菌,以微量液基稀释法分析常用抗真菌药物对白色念珠菌药物敏感情况,同时提取DNA后进行RAPD基因分型. 结果 临床分离的30株白色念珠菌对抗真菌药物敏感性分别为伏立康唑(100%)、两性霉素B(100%)、氟康唑(96.3%)、氟胞嘧啶(93.0%)、伊曲康唑(90.0%).30株白色念珠菌RAPD基冈分型共分为27型,没有出现相同的带型. 结论 在白色念珠菌感染的药物治疗中,伏立康唑、两性霉素B敏感性最好,氟康唑、氟胞嘧啶、伊曲康唑表现为较高的敏感性.我院神经外科重症监护室自2007年5月～11月期间并未出现白色念珠菌感染局部暴发流行.     

特殊表现型克隆氏病一例

病人男,14岁。因转移性右下腹痛,恶心、呕吐12小时,以急性阑尾炎收住院。查体:痛苦表情,心肺未见异常。右下腹压痛明显,反跳痛,肌紧张。血白细胞9.6×10~9/L。入院静点抗生素,4小时后疑有阑尾炎穿孔在硬膜外麻醉下行阑尾切除。进腹后见有淡黄色脓汁较多,大网膜下降於下腹部,将大网膜推至上腹,拭除部分脓汁,见暴露的小肠扩张,肠壁充血水肿;阑尾充血肿胀但无穿孔,无脓苔附着。因阑尾与术前体征及腹腔内情况不符,而探查腹腔。在脐下触及包块,并与后腹壁粘连,易剥离,将肿块提至切口外,见距回盲部约70cm处的回肠,基底在回肠系膜缘对侧,直径约2cm,长约6cm,尖端与局部系膜呈实质性粘连的袋状突出,充血、肿胀,有脓苔附着,距根部1.5     

应用实时荧光PCR技术快速检测B群链球菌

目的 建立一种能够快速、准确、特异的检测B群链球菌的实时荧光PCR检测技术。方法 以B群链球菌cfb基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,然后优化反应条件和反应体系,建立检测B群链球菌的实时荧光PCR方法,通过检测实验菌株,对照菌株以及模拟血液,尿液标本对该方法的特异性、敏感性以及灵敏度进行评价。结果 实验结果表明实时荧光PCR方法检测7株B群链球菌均为阳性,其他对照实验菌株均为阴性,且当菌液浓度为 20cfu//ml时,也能获得阳性结果,说明荧光定量PCR法敏感性、特异性以及灵敏度均较高。对模拟尿液标本进行检测时,其敏感性为90%,特异性为100%,检测下限约为2cfu/反应体系。由于标本类型和处理方式的不同,对模拟血液标本进行检测时,其检测灵敏度约为100cfu/mL,低于模拟尿液标本的检测灵敏度。结论 建立的荧光定量PCR技术方法为GBS的快速诊断以及更加准确有效的进行抗生素预防提供了依据,也为在新生儿中进行早发型GBS感染的快速准确诊断提供了新的思路。     

蛋白芯片技术及免疫印迹技术检测抗核抗体的比对研究

目的 通过比对免疫印迹法与蛋白芯片法对血清标本中抗核抗体的检测结果,验证这两种方法是否具有等效性. 方法 分别用免疫印迹技术和蛋白芯片技术检测70例临床标本的抗核抗体,记录检验结果,并对检查结果进行统计学分析. 结果 经配对资料卡方检验分析,两种方法测定SSA、SSB、SM、Scl-70、Jo-1和CENP时结果差异无...     

蛋白芯片技术及免疫印迹技术检测抗核抗体的比对研究

目的通过比对免疫印迹法与蛋白芯片法对血清标本中抗核抗体的检测结果,验证这两种方法是否具有等效性。方法分别用免疫印迹技术和蛋白芯片技术检测70例临床标本的抗核抗体,记录检验结果,并对检查结果进行统计学分析。结果经配对资料卡方检验分析,两种方法测定SSA、SSB、SM、Scl-70、Jo-1和CENP时结果差异无统计学意义(P>0.05)。仅在测定RNP时结果差异有统计学意义(P=0.04)。结论两种检测方法所测抗核抗体的结果一致性较好,蛋白芯片技术可用于临床抗核抗体的检测。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。     

广州市136株沙门菌耐药表型与分子分型研究

目的研究广州市2013年腹泻患者感染的沙门菌的血清型分布、耐药情况以及分子流行特征。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,并用纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对斯坦利沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌进行分子分型研究。结果 136株沙门菌被鉴定为29种血清型,数量居前三位的血清型为斯坦利沙门菌(19.9%)、肠炎沙门菌(15.4%)和鼠伤寒沙门菌(15.4%)。所有沙门菌菌株对四环素和萘啶酸耐药率最高,分别达到44.8%和39.7%,对环丙沙星的敏感率仅为19.9%;对头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松的耐药率均为7.4%。对3类及以上抗生素耐药的多重耐药菌有56(41.2%)株。27株斯坦利沙门菌和21株肠炎沙门菌分别可分为25个PFGE型和15个PFGE型。结论在广州市引起腹泻的沙门菌主要以斯坦利沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,分成多种PFGE型,呈高度散发。本地区沙门菌菌株的多重耐药现象严重,对于氟喹诺酮类和头孢类药物的耐药性升高。