实验室信息管理系统在专科医院检验科的应用和体会

本院是武汉市治疗传染病的定点专科医院,主要收治肝炎和结核病,同时承担应对突发公共卫生事件的职能,比如手足口病,甲型流感等。因此本院检验科的标本有的要求快速出结果,有的生长周期很长要等2个月才能报结果(比如分枝杆菌培养),虽然检验科自动化仪器比较普遍,但漏单少项及漏费、     

2011年武汉及周边城市手足口病病原学及流行病学研究

目的 了解武汉市及周边城市2011年4月至2012年3月手足口病的病原学及流行病学特征,为本地区手足口病的防治提供依据.方法 采集手足口病患者咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸.结果 2011年4月至2012年3月共收集手足口病咽拭子标本1844例,其中EV71阳性372例,阳性率为20.2％;CA16阳性460例,阳性率为24.9％;EV71和CA16双阳性38例,阳性率为2.1％.在病例收集期间,武汉及周边城市暴发的手足口病有2个高峰期,第1个高峰期为2011年5～7月春末夏初季节,EV71亚型为主要病原体;第2个高峰期为2011年9～12月秋末冬初季节,CA16病毒为主要病原体;发病患者集中于1～3岁儿童,且男性明显多于女性;散居儿童人数明显多于幼托儿童;EV71亚型患者发热、中枢神经系统(呕吐、肢颤、嗜睡和惊厥)症状所占比例要显著高于CA16亚型.结论 2011年武汉市及周边城市2个手足口病高峰期的主要病原体分别是由EV71和CA16亚型引起的,及早了解手足口病病原体的构成及流行病学特征,对于其防控具有重要意义.     

γ-干扰素释放试验在肺结核和肺外结核诊断中的应用

目的:探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在肺结核和肺外结核诊断中的应用价值。方法:收集273例结核病患者与45例健康体检者肝素钠抗凝全血,采用国产IGRA试剂检测其血浆γ-干扰素含量,同时与结核菌素皮肤试验(TST)结果进行平行分析比较;采用抗酸染色(AFB染色)法对结核病患者痰液标本进行染色。结果:国产的IGRA试剂和TST实验的敏感性分别为85.35%和72.53%,特异性分别为86.54%和53.33%,阳性预测值分别为97.08%和90.41%,阴性预测值分别为52.94%和24.24%,准确性分别为85.22%和69.81%。两种方法对肺结核的检出率分别为85.71%(180/210)和74.76%(157/210),二者相比较,差异有统计学意义(χ2=7.943,P<0.01);两种方法对肺外结核的检出率分别为84.13%(53/63)和68.25%(43/63),二者相比较,差异也有统计学意义(χ2=4.375,P=0.036);但两种方法各自对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异。210例肺结核患者中AFB阳性73例,AFB阴性者137例,其中AFB阳性肺结核患者中IGRA阳性率为89.04%(65/73),AFB阴性肺结核患者阳性率为83.94%(115/137);肺外结核63例患者AFB均阴性,IGRA阳性率为84.13%(53/63)。结论:IGRA比TST对诊断结核病有较高的敏感性与特异性,尤其是对AFB阴性的肺结核和肺外结核有80%以上的检出率,有很好的临床应用前景。     

InnowaveDX MTB/RIF对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药检测性能评估

目的评估结核分枝杆菌(MTB)和利福平耐药突变检测试剂盒(InnowaveDX MTB/RIF, 简称InnowaveDX)检测痰液对MTB复合群及利福平耐药的诊断价值。方法前瞻性连续纳入2020年6月19日至2022年5月16日湖南省结核病防治所、河南省传染病医院和武汉市金银潭医院就诊的具有结核病体征的患者1 328例, 依据纳入及排除标准, 最终纳入1 035例肺结核患者(确诊患者357例, 临床诊断患者678例)和180例非结核患者。收集所有患者的痰液样本, 进行常规痰涂片、痰培养、药敏试验, 并评价Xpert?MTB/RIF(简称Xpert)和InnowaveDX对肺结核和利福平耐药的诊断价值。对肺结核的诊断分别以临床诊断和MTB培养结果为参考标准, 对利福平耐药的评价分别以表型药敏试验和Xpert为参考标准, 分析两种检测方法对结核病诊断和利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。两种检测技术的一致性分析行kappa检验。结果以临床诊断为参考标准, InnowaveDX对1 035例临床诊断肺结核患者检测敏感度[58.0%(600/1 035)]高于Xpert[51...     

IGRA在肺结核诊断中的应用

目的探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在肺结核诊断中的应用价值。方法收集124例肺结核与45例健康体检者肝素钠抗凝全血,采用IGRA试剂盒检测其血浆γ-干扰素含量,同时应用蛋白芯片识别仪检测其结核菌蛋白16Kda和38Kda以及脂阿拉伯甘露糖(LAM)抗体含量,应用ELISA检测结核分枝杆菌抗体(TBAb),并将三种检测结果进行平行分析比较。结果 IGRA、蛋白芯片和TBAb的敏感性/阳性率分别为86.29%、67.74%和69.35%,三者相比较,差异有统计学意义(χ2=13.769,P<0.01)。结论 IGRA比蛋白芯片、TBAb对诊断肺结核有更高的敏感性,有很好的临床应用前景。     

128例RhD阴性献血者DEL表型筛查与基因型分析

目的:分析武汉地区RhD阴性献血者中DEL表型的分布及RhD基因情况。方法:血清学直接凝集法检测D、C、c、E、e抗原,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认RhD阴性血型,对IAT确认为RhD抗原阴性的样本采用吸收放散方法从中筛选DEL型;应用PCR-SSP技术检测DEL献血者RhD基因型。结果:血型血清学试验初筛为RhD阴性的128例献血者标本中,IAT试验检出阳性9例,经鉴定为D变异型;剩余119例样本中吸收放散结果阳性31例,确定为DEL型。119例RhD阴性献血者中68例ccee,39例Ccee,5例CCee,5例ccEe和2例CcEe。128例样本检出DEL型31例,占比为24.22%,表型分布为Ccee 23例,CCee 5例,ccEe 2例,CcEe 1例;送检的DEL型标本第9外显子均有1227GA突变,其中杂合子24例(DEL/d),纯合子7例(DEL/DEL)。结论:武汉地区DEL型献血者表型分布与其他地区相似,RhD 1227A是武汉地区DEL表型个体的重要遗传标记。     

牛分枝杆菌特异性四联融合蛋白在牛结核病诊断中的临床应用

目的以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。方法用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。iELISA与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本;以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国黑白花奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清;对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性。结果iELISA与ICG的符合率为93.33%(140/150),与TST的总符合率为87.32%(489/560),与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。结论该方法具有较高的灵敏度与特异性,与其它方法有较高的符合率。     

JNK2在早期糖尿病小鼠视网膜中的表达及作用

目的探讨JNK2在早期糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠视网膜的表达和作用,为进一步深入探讨糖尿病视网膜病变的发病机制及早期治疗研究提供理论依据。方法 C57BL/6雄性小鼠60只随机分为DM组42只及正常组18只,DM组一次性腹腔注射5g·L-1STZ(150mg·kg-1体质量)诱发DM模型,正常组腹腔注射同体积的0.1mol·L-1柠檬酸钠缓冲液,于造模成功后2周、4周、8周分别处死正常组小鼠各6只,DM组小鼠各14只,取双眼眼球用于实验。其中,左眼提取视网膜用于实时定量RT-PCR,检测JNK2基因的表达变化,右眼行HE染色和TUNEL染色,分别观察视网膜在各时间点的形态学改变及视网膜神经节细胞的凋亡情况。结果正常组2周、4周、8周时JNK2基因表达水平分别为(2.31±0.53)g·L-1、(2.54±0.42)g·L-1、(2.26±0.67)g·L-1,各时间点表达无明显差异(P>0.05);DM组各时间点JNK2基因表达水平分别为(2.34±0.56)g·L-1、(4.51±0.64)g·L-1、(11.43±0.37)g·L-1,表达量随病程的延长而增加(P<0.05)。各时间点神经节细胞凋亡率在正常组分别为(0.77±0.73)%、(0.72±0.38)%、(0.87±0.76)%,差异无统计学意义(P>0.05);在DM组分别为(0.22±0.47)%、(6.87±1.17)%、(21.65±2.95)%,随DM病程延长神经节细胞凋亡率增加(P<0.05)。各时间点每高倍视野视网膜神经节细胞数在正常组小鼠分别为(47.83±3.76)个、(48.17±3.81)个、(47.74±4.16)个,各期表达无明显差异(P>0.05);在DM组分别为(45.96±4.20)个、(34.20±2.25)个、(30.19±3.54)个,神经节细胞的数量随DM病程的延长逐渐减少(P<0.05),且视网膜形态出现组织学改变。结论 JNK2参与了小鼠早期视网膜神经节细胞的凋亡过程,且有促进视网膜神经节细胞凋亡的作用。     

2011~2012年武汉地区肠道病毒71型VP1基因的遗传进化分析

摘要：目的：观察武汉地区手足口病（HFMD）患儿肠道病毒71型（EV71）的基因型及其重组特点。 方法：收集2011年4月至2012年3月武汉地区1 844例HFMD患儿EV71阳性的咽拭子标本并进行病毒分离鉴定,对124株EV71病毒分离株的508 bp VP1基因序列进行测序,选择2株来自重症和1株来自轻症患儿的EV71毒株,构建VP1序列系统进化树并分析其全基因组序列的重组特点。 结果：VP1序列系统进化分析显示,124株EV71型均属于C4基因型,其中56株属于C4a亚群,68株属于C4b亚群,Bootscan和5′UTR、P1、P2、P3区的进化树证实3株EV71分离株均为亲本株C4a型毒株guangdong/GD/CHN/2009和C4b型毒株SHZH98/GD/CHN/1998在P2区2A-2B基因交界处发生型内重组所产生。 结论: 2011年4月至2012年3月武汉市及周边地区的EV71分离株均为C4基因型,与1998年以来中国大陆的优势株流行一致,且C4基因型存在型内重组现象。     

2011～2012年武汉地区柯萨奇病毒A16型VP1基因的遗传进化分析

目的了解武汉地区手足口病(HFMD)患儿柯萨奇病毒A16型(CA16)的基因型及重组特点。方法收集2011年4月至2012年3月武汉地区1 844例HFMD患儿的咽拭子标本,用实时荧光定量PCR检测CA16核酸,阳性标本进行病毒分离,对分离株进行VP1基因序列测序,选择2株来自重症和1株来自轻症患儿的CA16病毒株构建VP1序列系统进化树并分析其全基因组序列的重组特点。结果 1 844例HFMD患儿的咽拭子标本中分离出42株CA16,VP1序列系统进化分析显示,所有分离株均属于B1亚型,其中13株属于B1a亚群,29株属于B1b亚群。重组分析表明,3株CA16分离株均为亲本株CA16 A型毒株FY18/AH/CHN/2008和EV71 A型毒株Hubei-09/HB/CHN/2009型间重组所产生,重组交叉位点为基因组P2区2A和2B基因交界处。结论武汉地区的CA16分离株均为B1亚型,其中B1b亚群占明显优势,且CA16分离株存在亲本株CA16A型和EV71 A型毒株的型间重组。