原发性肝细胞癌患者外周血单个核细胞中HBV-DNA含量检测的意义

目的:了解原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的整合情况,以揭示其在HCC发病机制中的作用。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测32例HCC患者和45例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清和PBMC中HBV-DNA含量,引物和探针设计选择HBVC区的DNA序列。结果:HCC组和CHB组患者血清中HBV-DNA阳性率分别为62.5%(20/32)和46.7%(21/45)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为105.50±1.52和105.05±1.45copies/ml,PBMC中HBV-DNA阳性率分别为87.5%(28/32)和51.1%(23/45)(P<0.01)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为104.51±1.32和104.05±1.05copies/ml;HCC组血清和PBMC中HBV-DNA阳性率相比较有统计学差异(62.5%比87.5%,P<0.05);HCC组和CHB组血清和PBMC中HBV-DNA同时阳性时,其HBV-DNA含量均呈正相关(P<0.01)。结论:HCC患者PBMC中存在HBV-DNA整合的现象;作为临床预测HCC发生的风险指标,PBMC中HBV-DNA含量的检测与穿刺肝组织相比具有轻创或无创的优点。     

SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义

目的探索SYBR GreenI联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。方法选择浓度为108.48、105.70和103.70copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和<1×103.0copies/ml的阴性血清各1份,在TaqMan-PCR混合反应体系中加入SYBR Green I组成双荧光PCR(TaqMan SYBR Green I组),同时进行TaqMan和SYBR Green I的单荧光PCR(分别为TaqMan组和SYBR Green I组),设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次。结果TaqMan SYBR Green I组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±、105.79±、103.81±,与TaqMan组的108.49±、105.69±、103.72±copies/ml0.320.290.300.310.300.25对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P>0.05);与SYBR Green I组的108.41±、0.35105.21±和103.26±copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和0.340.262.62,P<0.05)。TaqMan SYBR Green I组和SYBR Green I组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度(Tm)分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。结论SYBR Green I联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNATm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路。     

产妇外周血单个核细胞及其新生儿尿液中人巨细胞病毒核酸的检测

人类巨细胞病毒(HCMV)是先天性感染中最常见的致畸、致残病毒之一[1, 2].流行病学调查显示我国育龄妇女大多数已感染过HCMV [3].为了解HCMV的感染与新生儿黄疸、早产儿和低出生体重儿的相关性以及新生儿尿液作为HCMV感染的检测标本的可行性,我们应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测了产妇血浆、外周血单个核细胞(PBMC)及其新生儿尿液中HCMV-DNA含量.     

黛矾散对雌激素诱导的大鼠肝内胆汁淤积肝细胞膜流动性的影响

观察黛矾散及其各组分对雌激素苯甲酸雌二醇 (EB)诱导的大鼠肝内胆汁淤积模型肝细胞膜流动性的影响。采用DPH荧光探针技术测定EB复制雌激素性肝内胆汁淤积模型肝细胞亚膜 (窦膜和毛细胆管膜 )流动性的变化。结果表明 :雌激素所致肝内胆汁淤积中 ,实验大鼠肝细胞窦膜、毛细胆管膜流动性明显降低 ,经口投予黛矾散及其组分明矾和青黛后 ,均可不同程度拮抗雌激素所致膜流动性的降低 ,且黛矾散的作用优于单用明矾或青黛的作用 ,而明矾的作用又优于青黛     

不同感染途径的丙型肝炎患者血清HCV RNA及抗-HCV与ALT水平的分析

目的:探讨丙型肝炎(丙肝)患者感染途径与其肝脏病变程度的关系。方法:根据感染途径的不同将210例丙肝患者分输血后丙肝(PTHC组)102例和散发性丙肝(SHC组)108例,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术、酶联免疫吸附方法(ELISA)和自动生化速率法分别检测两组患者血清中HCV RNA含量、抗-HCV及ALT水平。结果:PTHC组HCV RNA阳性率和ALT的异常率均显著高于SHC组(χ2=23.39,P<0.01和χ2=13.73,P<0.01);HCV RNA阳性患者中,PTHC组的HCV DNA含量均值显著高于SHC组(t=4.29,P<0.01);ALT异常患者中,PTHC组的ALT水平均值显著高于SHC组(t=4.30,P<0.01)。HCV RNA的含量与ALT水平呈正相关(r=0.794,P<0.01)。结论:PTHC组患者病毒血症水平和肝脏功能损害的程度均显著高于SHC组,HCV不同的感染途径可导致患者不同的感染结果。     

乙肝病毒核苷类似物耐药位点分析

目的:建立巢式PCR结合测序检测乙型肝炎病毒(HBV)耐药位点的方法,确定患者的HBV基因型和耐药突变情况。方法:采用特异性引物进行巢式PCR扩增HBV DNA,产物测序后,利用MEGA 3.1对测序结果进行分析判断有无耐药突变的产生。结果:100例乙肝病毒载量阳性患者共检出48例有耐药突变,其中概率最高的是rt204位点的YVDD 15例、YIDD 13例;拉米夫定组的耐药概率明显高于对照组;耐药组的ALT和HBV DNA水平明显高于非耐药组。结论:传统的核苷类似物如拉米夫定会产生耐药,耐药一旦发生肝功能和HBV DNA会明显升高,巢式PCR结合测序法可对患者体内的HBV耐药突变位点进行有效检测,有利于指导临床用药。     

黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮(艹卓)受体表达的影响

目的:探讨黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮受体表达的影响。方法:采用黄芪注射液腹腔注射,在小鼠感染血吸虫满8周开始治疗,疗程12周,与生理盐水作对照。应用实时监测荧光定量PCR技术,于感染满8周、12周和20周时检测肝组织外周型苯二氮革受体mRNA的表达水平。结果:黄芪治疗组小鼠外周型苯二氮受体mRNA水平在感染12周和20周时均明显低于同期对照组,与正常组接近;黄芪治疗组治前、治中和治后外周型苯二氮受体mRNA水平比较差异无统计学意义,而对照组治疗前后差异显著。结论:黄芪可降低血吸虫病小鼠肝组织外周型苯二氮革受体mRNA表达水平,提示黄芪可能通过此机制阻止血吸虫病肝损伤的发展。     

血糖仪自动采血枪携带乙型、丙型肝炎病毒调查

近年来 ,便携式血糖仪以其操作简便、报告快速、准确性好的特点 ,在临床上广泛使用。然而我们在使用过程中发现与皮肤接触的枪头表面和内壁残留有微量血液 ,患者有可能因此相互传染一些经血液传播的血源性传染病。为了解枪头携带病毒的情况 ,我们进行了以下实验 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　 仪器与试剂　血糖仪 (美国Lifescan公司 ,ONETOUCHⅡ型 )。全自动荧光定量PCR仪 (美国PE公司 ,5 70 0型 )。乙型肝炎病毒核酸 (HBV DNA)、丙型肝炎病毒核酸 (HCV RNA)定量试剂盒 (上海 ,复星公司 )。1.2　 方法　选择已知A、B、C、D 4…     

运用血清HBV DNA正确评价HBe转换的临床意义

为探讨不同类型乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)患者血谤中HBV DNA与HBeAg(-)/抗HBe( )(HBe转换)的相关性,正确评价HBe转换的临床诊断意义,我们应用PCR技术检测了具有HBe转换的不同类型乙肝患者血清中的HBVDNA,现将结果报告如下。     

丙氨酸氨基转移酶正常人群隐匿型乙型肝炎病毒核酸的检测

[目的]了解隐匿型乙型肝炎病毒(occult HBV)在丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常人群中的感染情况。[方法]应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测538例ALT正常、HBsAg阴性人群血清中HBV-DNA水平。[结果]538例人群中HBV-DNA阳性率为15.6%,男性(22.8%)显著高于女性(7.8%)(P<0.01),≥50岁(16.7%)与<50岁(15.5%)差异无统计学意义(P>0.05),有输血史(21.9%)高于无输血史(14.1%)(P<0.05),且HBV-DNA水平均<103.6copies/ml。[结论]ALT正常人群中存在隐匿型HBV感染,且与输血史和性别有关。提示临床进行输血和器官移植等异体成分治疗时,在检测ALT和HBV标志物的同时,应结合灵敏度高的FQ-PCR方法检测HBV-DNA,以杜绝隐匿型HBV传播的可能性。