非医学中心医院复制基于膜解剖的腹腔镜直肠癌根治术的初步经验(附23例报告)

目的:探讨非医学中心医院复制基于膜解剖直肠癌根治术的可行性及应用价值。方法:回顾分析23例腹腔镜直肠癌手术(基于膜解剖术式)患者的临床资料,其中20例行经腹直肠癌根治术(Dixon),3例行经腹会阴联合直肠癌根治术(Miles)。记录手术时间、术中出血量、术后相关并发症情况、术后恢复情况等。结果:23例手术均获成功,手术时间120~280 min,平均(186.1±44.4)min;术中出血量5~60 mL,平均(17.0±14.2)mL;淋巴结数量5~21枚,平均(12.6±4.5)枚;住院8~17 d,平均(10.3±3.0)d。术后1例患者出现吻合口出血,经保守治疗后治愈,无手术死亡病例。结论:基于膜解剖的腹腔镜下直肠癌根治术安全性高,肿瘤根治性较好,可行性高,术者具备扎实的理论知识,操作认真,具备必要的手术器械,配合规范默契,完全可复制,适合在非医学中心医院推广。     

Cyclins非时相性表达和MDR1与胃肠道恶性肿瘤分期的研究

目的：研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins的表达规律，以此为依据对恶性肿瘤进行分型，并结合肿瘤标本中MDR1（多药耐药基因）的表达情况，与肿瘤TNM分期进行相关性研究。方法：使用流式细胞术分析新鲜手术获取的肿瘤标本的CyclinD1，E，A，B1及与MDR1表达情况，再记录术后病理报告进行TNM分期。结果：根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ～Ⅳ型cyclin非时相性表达类型，此Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期有一致性（Kappa值为0．599，P〈0．01），Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高（Spearman相关系数0．495，P〈0．01）。结论：根据4种主要Cyclins（Cyclin D1，E，A，B1）的表达情况对胃肠肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义，可以说是对“分子分期”的一种探索。在消化道肿瘤中，MDR1与肿瘤细胞周期破坏类型有关，对治疗具有指导意义。     

胃肠道恶性肿瘤Cyclins表达分型与MDR1及TNM分期的关系

目的:研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins (Cyclin D1,E,A,B1)的表达规律,以此为依据对恶性肿瘤进行分型,并结合肿瘤标本中 MDR1(多药耐药基因1)的表达情况,与肿瘤 TNM分期进行相关性分析．方法:采用流式细胞术分析新鲜手术获取的 62例肿瘤标本(胃癌32例,结直肠癌30例)的 Cyclin D1,E,A,B1及MDR1表达情况,再记录术后病理报告进行TNM分期．结果:根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ-Ⅳ型Cyclin非时相性表达类型,此Ⅰ-Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期具有一致性,Kappa系数等于0．599(P<0．01)．Ⅰ- Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高,等级相关系数rs为0．495(P<0．01)．结论:根据Cyclins的表达情况对消化道恶性肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义．在消化道肿瘤中,MDR1与肿瘤细胞周期素表达类型有关,对治疗具有指导意义．     

改良的自动化吻合在肠道重建中的应用(附146例报告)

消化道重建是胃肠道手术过程中最基本的操作步骤之一,传统的消化道重建通常由手术者手工完成,既延长了手术的时间,其质量也由于手术者经验而存在着较大的差异.近年来自动化吻合器械在消化道重建中得到广泛应用,既缩短了手术的时间,又保证了重建的质量.但在使用自动化吻合器进行肠道重建的过程中,由于步骤繁琐,器械的耗费较多,限制了其广泛应用.我院在实践过程中,对传统的自动化吻合方式进行了改良,既简化了操作,又减少了器械的消耗,取得了较为满意的效果,现报告如下.     

双光源流式细胞术三参数细胞周期分析

目的建立双光源流式细胞仪三参数细胞周期分析方法,同时检测两种细胞周期素和细胞DNA含量,分析非时相性的细胞周期素的表达。方法运用免疫荧光标记技术对两种cyclin标记,一种用直接法(FITC标记),另一种用间接法(RPE-Cy5标记的二抗),同时进行细胞核染色(荧光素DAPI),双光源二点激发,三波段定量检测,数据运用cellquest软件分析。mAMSA和mimosine诱导非时相性的细胞周期素表达。结果两种cyclin可同时检测,互不干扰,而且不需要荧光补偿,与单标相比无明显差别,cyclin及:DNA均可半定量分析。Cyclin A/ cyclin E/DNA分析可将对数生长期的MOLT-4细胞分为六个亚细胞群(G10、1le、G1l、S、G2、M),mimosine处理的细胞可见G1期cyclin B1表达,mAMSA处理的细胞有G2期cyclin E的异位表达。结论运用免疫荧光技术在流式细胞仪上三参数细胞周期分析可以快速定量检测两种cyclin和DNA含量,更精确地对细胞增殖进行分析。     

新鲜肿瘤标本活细胞与固定细胞的 DNA含量分析比较

目的：建立一种以新鲜细胞进行临床肿瘤DNA含量分析的方法。方法：血液肿瘤取开肝素抗凝外固血或骨髓样本，用淋巴细胞分层液分离纯 化单个核细胞；实体瘤组织则用机械法制成单细胞悬液。将细胞分成两份，一份酒精固定过夜，流式细胞术常规方法测定DNA含量，另一份直接用PIPES（piperazine-N,N‘-bis[2-ethanesulfonic acid]disodium salt)缓冲液配制的碘化丙锭（propidium iodide,PI)染色，以流式细胞术进行DNA含量测定，并与同期固定细胞的DNA含量检测结果进行比较。结果；同类型的肿瘤细胞，其固定前后G0／G1期细胞峰的变异系数（ocefficient of variation,CV)没有明显差异（t检验，P＞0.05）。重复实验结果显示，新鲜细胞DNA含量分析结果稳定。结论：用PIPES缓冲液配制的PI染液染色新鲜细胞，可以对临床肿瘤的细胞增殖状况和DNA倍性进行分析。     

膜联蛋白V与碘化丙啶用于细胞周期特异性凋亡的检测

目的 建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法 将急性早幼粒细胞白血病细胞株（HL－60）分别经喜树碱（CAM）、紫外线诱导、及喜树碱和N－甲苯磺酰基－L－苯基丙氨酸氯甲基酮（TPCK）共同诱导后，用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V（Annexin V）进行标记，经1％不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定，再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后，流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率，并与DNA链缺口标记法（TdT）和常规Annexin V法检测结果进行比较。结果 细胞凋亡的周期特异性分析：膜联蛋白V／碘化丙啶法（PA法）和TdT法结果一致，CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期；GAM和TPCK共同诱导试验显示，PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度，TdT法则不能有效检测；而常规Annexin V法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析。凋亡率的检测：HL－60经CAM、紫外线、CAM与TPCK三种方法诱导后，PA法检测凋亡率的结果（17.3%、34.7%、35.9%）与常规Annexin V法的检测结果（18.1%、35.6%、37.0%）一致（P＞0.05），而TdT法（10.7%、19.5%、－）则明显偏低（P＜0.01）。结论 PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测，其稳定、可靠、灵敏度高。     

手助腹腔镜下右半结肠切除术的配合

对17例手助腹腔镜下右半结肠切除术与同期施行的59例传统右半结肠切除术进行回顾性分析。结果手助腹腔镜下右半结肠切除术与传统右半结肠切除术比较,手术时间缩短,术后肠蠕动恢复时间提前,住院时间减少(均P<0.05)。提出手助腹腔镜手术作为一种新的手术方式,较传统开腹手术更优越。手术室护士在手术前要熟悉手术步骤,备好特殊用物,手术中根据不同的手术方式及吻合方法提供不同的器械,做好配合工作。     

胃癌组织细胞CD44v6和nm23-H1的表达及临床检测意义

为探讨 CD4 4 v6和 nm2 3- H1表达变化与胃癌临床病理学特征及淋巴结转移的关系。应用流式细胞免疫法检测 2 1例胃癌标本 CD4 4 v6和 nm2 3- H1基因产物的表达。结果显示 :胃癌合并淋巴结转移者 CD4 4 v6的表达 (0 .33±0 .15 )明显高于未合并淋巴结转移者 (0 .0 5± 0 .0 2 ,P<0 .0 5 ) ,其 nm2 3- H1的表达 (0 .11± 0 .0 6 )明显低于未合并淋巴结转移者 (0 .6 2± 0 .2 7,P<0 .0 5 )。在 2 1例胃癌中 CD4 4 v6和 nm2 3- H1基因产物表达呈显著负相关 (Spearm an相关系数 r=- 0 .6 382 ,P<0 .0 1) ,CD4 4 v6的表达与胃癌的临床病理分期 (PTNM)呈极显著的正相关 (P<0 .0 1) ,而 nm2 3-H1的表达与胃癌的临床病理分期 (PTNM)呈显著的负相关 (P<0 .0 5 )。提示 :CD4 4 v6过表达和 nm2 3- H1低表达在胃癌淋巴结转移中的关系为相对独立的联合作用 ,同时检测 CD4 4 v6和 nm2 3- H1基因产物的表达能为判断胃癌的淋巴结转移和预后提供参考依据     

对MOLT-4细胞用cyclin E+A/DNA流式细胞术分析 - 细胞周期六分法的建立

目的　越来越多的资料表明肿瘤是一类细胞周期性疾病 ,从而使得细胞周期分析在细胞生物学 ,肿瘤生物学领域显得格外重要。迄今为止 ,有很多方法应用于细胞周期分析中 ,但这些方法因为这样或者那样的缺点已无法适应今天的细胞周期分析。本研究的目的是建立一种新的 ,更为合理的细胞周期分析方法。方法　将cyclinE以及cyclinA的单克隆抗体按一定的比例混合后与固定了的MOLT 4细胞孵育 ,后用流式细胞仪检测。结果　我们发明的CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。而在DNA含量直方图仅能区分三个细胞群体 :G0 /G1、S、G2 /M期细胞。结论　CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能同时在同一样本中将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。其对细胞周期分析明显优于目前采用的细胞周期分析方法 ,并且有明显的生物学基础。