基于自噬途径观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞凋亡的影响

目的 观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外培养A549细胞,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖的情况,并计算A549细胞的存活率,筛选出药物的浓度。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法检测各组及加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组及加入3-MA后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、微管相关蛋白1轻链3 （LC3 Ⅱ）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP1）及PARP1、活化的死亡激动剂（t-Bid）及Bid、泛素结合蛋白p62的表达情况。结果 与空白组比较,干预24 h,0.25 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率明显下降（P<0.05）,0.5、1、2、4 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率显著下降（P<0.01）;48 h时0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率呈浓度依赖性显著下降（P<0.01）,且4 g·L^-1飞龙掌血醇提物细胞的存活率不到10%。流式细胞术结果显示,与空白组比较,0.5 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞的总凋亡率明显增加（P<0.05）,1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组时细凋亡率显著增加（P<0.01）;与2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组和3-MA组比较,3-MA联合飞龙掌血醇提物组凋亡率显著降低（P<0.01）。与空白组比较,1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组促凋亡蛋白cleaved PARP1、Bax、t-Bid蛋白表达明显增加（P<0.05,P<0.01）;Bid蛋白表达在2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组显著减少（P<0.01）;0.5、1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达明显减少（P<0.05,P<0.01）;0.5、1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组p62的蛋白表达显著下调（P<0.01）,LC3 Ⅱ蛋白表达显著上调（P<0.01）,具有浓度依赖性。结论 飞龙掌血醇提物能显著抑制A549细胞的增殖,其机制可能与促进细胞自噬和诱导细胞凋亡,共同促进细胞死亡有关。     

三百棒醇提物通过抗炎和凋亡作用减轻CIA大鼠的关节炎北大核心CSCD

探讨三百棒醇提物(Toddalia asiatica alcohol extract,TAAE)通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其机制研究。首先建立CIA大鼠模型,然后每天口服TAAE和雷公藤多苷片(TGT),每周对后肢关节的肿胀程度进行评分。给药35 d后,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子(TNF-α、IL-6)的水平;TUNEL法检测TAAE对大鼠滑膜组织细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达水平;RT-qPCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-1β及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的mRNA水平。TAAE可减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清炎症因子水平,改善滑膜组织病理改变,促进滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜炎症。此外,RT-qPCR和Western blot实验结果显示TAAE上调促凋亡相关蛋白Bax水平,下调抑凋亡蛋白Bcl-2水平,激活caspase-3促进了滑膜组织细胞凋亡,TAAE还有效地下调了p-PI3K、p-Akt蛋白水平。该研究表明,TAAE对CIA大鼠的关节炎具有很好的治疗作用,并且对降低炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,促进滑膜细胞凋亡有关。总体而言,该研究为三百棒的抗炎机制的研究提供了新的线索,并为临床更好应用三百棒治疗炎症性及自身免疫性疾病提供理论依据。     

滇白珠水提物对慢性阻塞性肺疾病大鼠氧化应激的影响

目的观察滇白珠水提物干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度的变化,探讨其在COPD中的作用机制。方法选取雄性SD大鼠36只,将其随机分为对照组、模型组和用药组,各12只。用药组在模型组基础上于每天吸烟前利用灌胃针灌滇白珠水提物,对照组则在模型组基础上灌等量0.9%氯化钠溶液。观察3组大鼠肺组织形态学变化,以及肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中SOD、MDA表达情况。结果对照组肺组织和BALF中SOD浓度高于用药组,用药组SOD浓度高于模型组(P0.05);模型组肺组织和BALF中MDA浓度高于用药组,用药组MDA浓度高于对照组(P0.05)。结论滇白珠水提物可降低COPD大鼠SOD、MDA的表达,对COPD的防治有一定指导意义。