去甲斑蝥素通过c-Jun氨基末端激酶通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分~([1-3]),曾试用于治疗原发性肝癌,能够缓解患者病情~([4-8]).但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用~([9-12]).近年来陆续合成了不良反应少的同类药物,如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺及甲基斑蝥胺等.     

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

Study on norcantharidin-induced apoptosis in SMMC-7721 cells through mitochondrial pathways

Objective: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced SMMC-7721 hepatoma cell apoptosis. Methods: SMMC-7721 cell growth inhibition was measured by the MTT method. Apoptosis was detected by Annexin Ⅴ/propidium iodide staining. The mitochondrial membrane potential was measured by flow cytometry. Western blot analysis was used to evaluate the level of cytochrome c, caspase-3, AIF, Bcl-2 and Bax expression. Results: NCTD inhibited SMMC-7721 cell growth in a time-and dose-dependent manner. The cells treated with NCTD showed the loss of mitochondrial membrane potential. The activities of caspase-3, cytochrome c, AIF, and Bax were up-regulated after NCTD treatment at different doses. The expression of Bcl-2 was decreased after treatment with NCTD. Conclusions: NCTD could induce SMMC-7721 cell apoptosis. The activation of the mitochondrial pathway was involved in the process of NCTD-induced SMMC-7721 cell apoptosis.     

健脾解毒方逆转大肠癌多药耐药基因的研究

目的 从分子生物学的角度探讨健脾解毒方逆转大肠癌多药耐药基因的作用机制,为中医健脾解毒法治疗大肠癌提供理论依据.方法 应用健脾解毒方药对SD大鼠进行灌胃,采集动脉血制备健脾解毒方药物血清,在体外培养人结肠直肠腺癌耐长春新碱细胞HCT-8/V,分别加入培养液配制的5％、10％、15％、20％健脾解毒方药物血清,采用MTT方法检测各组HCT-8/V细胞生长抑制率.结果 健脾解毒方药物血清对HCT-8/V细胞有抑制作用,随浓度升高、时间延长,其抑制作用增强,呈剂量和时间效应关系.20％的药物血清和VCR在24、48、72 h对肿瘤细胞的生长抑制率均有统计学差异(P＜0.01),随作用时间延长,对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强.结论 健脾解毒方可逆转大肠癌多药耐药基因,并伴随相关基因的调控.     

去甲斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

人类用斑蝥治疗疾病已有2000多年的历史,斑蝥为芫青科昆虫南方一大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥体,《木经》中称其味辛、热,有大毒,归肝、胃、肾、大肠和小肠,具有攻毒蚀疮,逐淤散结的功效。斑蝥抗癌的主要有效成分为斑蝥素,主要用于治疗肝癌、食管癌及胃癌等,但斑蝥素对泌尿系统刺激作用较强烈,应用受到限制。去甲斑蝥素(NCTD)是斑蝥素的衍生物,是从斑蝥中提取斑蝥素并经人工合成的一种新型低毒的抗癌药物,具有抗癌和升白细胞的作用,是当今国际上第一种有升高白细胞作用的抗癌药物。随着研究的深入,人们对NCTD的抗癌作用机制有一定的了解。     

术中低渗腹腔温热灌注化疗对胃肠吻合口愈合影响的实验研究

目的:观察术中腹腔低渗热灌注化疗对胃肠吻合口愈合的影响。方法:将40只新西兰大白兔随机分成4组,每组10只。A组(对照组):腹腔内常温生理盐水灌注;B组(腹腔灌注化疗组):腹腔内予常温5-FU生理盐水溶液(浓度250mg/L)灌注;C组(腹腔温热灌注化疗组):腹腔内予43℃5-FU生理盐水灌注;D组(腹腔低渗温热灌注化疗组):43℃5-FU蒸馏水溶液灌注。观察术后吻合口破裂压,吻合口羟脯氨酸含量和组织病理学改变。结果:术后第10天,所有动物再次剖腹探查未发现吻合口瘘。各实验组与对照组吻合口破裂压比较无显著差异(P>0.05)。各实验组之间无差异(P>0.05);各实验组羟脯氨酸含量明显低于对照组(P<0.05);各实验组之间无差异(P>0.05);吻合口病理显示,实验组:黏膜、黏膜下层不连续,黏膜下肌层缺如,无明显纤维组织反应,炎症细胞浸润,淋巴滤泡形成。对照组:吻合口黏膜上皮移行、延续,伴随纤维组织增生和少量脂肪组织、血管形成,肌层增厚,炎性反应较轻。结论:腹腔低渗热灌注化疗可能对胃肠吻合口产生不良影响。     

优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究

目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01～0.1TCID50),灵敏度较高。     

甲型流感病毒的分离及HA基因的序列分析

目的 分离临床流感患者的甲型流感病毒及对其HA基因进行序列测定,分析HA基因是否存在变异.方法 采用流感病毒的增殖、血液凝集实验、RT-PCR、蓝自筛选、酶切、DNA序列测定方法,获得甲型流感病毒HA基因的序列,进行序列分析.结果 甲型流感病毒HA基因RT-PCR的电泳条带为1700bp;酶切后电泳条带为1700bp和3000bp;并获得甲型流感病毒HA基因的序列.结论 从临床流感患者分离的流感病毒H1N1/H3N2其HA序列与以往的流感病毒序列无明显差异.     

去甲斑蝥素通过线粒体信号转导途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细胞色素c、caspase-3、AIF、Bcl-2和Bax的表达。结果:NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。用AnnexinⅤ/PI双染色法检测SMMC-7721细胞,随NCTD的剂量增加,细胞凋亡率也增加,呈剂量依赖性。用流式细胞仪检测细胞膜电位,随NCTD的剂量增加,线粒体膜电位也随之下降。应用Western blot analysis方法检测,NCTD可诱导caspase-3和AIF的活化及线粒体细胞色素c释放到胞浆中。并随NCTD的剂量增加,Bax的表达量上升,而Bcl-2的表达量下降。结论:NCTD能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,并可通过内源性线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡。