乙肝病毒X基因真核表达载体pEGFP-X的构建及其表达

目的：构建pEGFP—X真核表达载体，观察其在肝癌细胞株中的表达。方法：从质粒pcDNA3．1（＋）-X酶切获HBVX基因片段，克隆至pEGFP—N1；用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP—X载体；用脂质体法，将重组载体（pEGFP—X）和空载体（pEGFP-N1）瞬时转染肝癌细胞细胞株BEL-7402；分别用RT—PCR、荧光显微镜鉴定HBVX和EGFP基因表达。结果：鉴定证实pEGFP-X载体构建成功；该质粒瞬时转染的BEL-7402有HBVX基因表达，并发绿色荧光。结论：构建的pEGFP—X真核载体能在BEL-7402中表达，绿色荧光蛋白示踪利于表达HBVX基因稳定细胞株的筛选，并为探讨HBVX基因在HCC中的致瘤机理提供实验模型奠定基础。     

门冬氨酸鸟氨酸联合醒脑静治疗肝性脑病患者疗效及其对血清炎症因子水平的影响

目的 探讨应用门冬氨酸鸟氨酸联合醒脑静治疗乙型肝炎肝硬化并发肝性脑病(HE)患者的疗效及其对认知功能和血清炎症因子水平的影响。方法 将62例乙型肝炎肝硬化并发HE患者随机分为观察组31例和对照组31例,在常规治疗的基础上分别给予醒脑静或醒脑静联合门冬氨酸鸟氨酸静脉滴注,两组均持续治疗2周。采用ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,应用数字连接试验(NCT)、数字符号试验(DS)、简易智力状态检查量表(MMSE)和长谷川痴呆量表(HDS)行认知功能评价。结果 在治疗2周末,观察组病死率为19.4%,显著低于对照组的35.5%(P<0.05);治疗后,观察组MMSE评分为(28.1±3.2)分,显著高于对照组【(22.1±2.8)分,P<0.05】,HDS评分为(27.7±2.6)分,显著高于对照组【(19.0±2.1)分,P<0.05】,DS评分为(60.7±1.9)分,显著高于对照组【(43.1±4.0)分,P<0.05】,而NCT用时为(51.6±5.9)s,显著短于对照组【(62.4±6.5)s,P<0.05】;观察组血清IL-6水平为(11.8±0.9)ng/L,显著低于对照组【(14.9±1.0)ng/L,P<0.05】,血清CRP水平为(13.6±1.7)ng/L,显著低于对照组【(15.5±1.9)ng/L,P<0.05】,血清TNF-α水平为(12.0±1.0)ng/L,显著低于对照组【(15.9±1.2)ng/L,P<0.05】;观察组血氨(NH₃)水平为(54.9±5.6)μmol/L,显著低于对照组【(85.3±8.7)μmol/L,P<0.05】,而两组血清胆红素和白蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 应用门冬氨酸鸟氨酸联合醒脑静治疗乙型肝炎肝硬化并发HE患者有一定的效果,在综合治疗的基础上可降低近期病死率,可能与有效地抑制了机体的炎症反应,降低血NH₃水平有关,其远期疗效仍有待于进一步观察。     

肝衰竭患者真菌感染临床特点与干预措施北大核心CSCD

目的探讨肝衰竭患者真菌感染的临床特点与干预措施,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法回顾性分析2012年2月-2014年5月在医院进行治疗的46例肝衰竭真菌感染患者临床资料,留取感染患者标本送检,采用VITEK全自动微生物分析仪进行真菌鉴定,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 46例真菌感染患者共分离出46株真菌,以白色假丝酵母菌为主,共25株占54.35%;感染部位以口腔感染和呼吸道感染为主,分别占43.48%和19.57%;对患者分别给予碳青霉烯酶、伏立康唑、氟康唑及制霉菌素等抗真菌药物进行治疗,3~22d为一个治疗周期,有效率为76.09%。结论在对肝衰竭患者真菌感染进行原发肝脏疾病治疗时,早期合理使用抗菌药物,是改善患者预后的重要方法。     

靶向整合于MHCC 97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定

目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。     

应用短发夹状RNA研究HBV X 基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响

目的应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响.方法用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBV X基因的HepG2-X细胞的生长抑制率.以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性.应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化.结果MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率.As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P＜0.05),G2/M期细胞增多(P＜0.05).不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P＜0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P＜0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关.结论As2O3可诱导HepG2细胞凋亡.表达HBV X基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关.     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用不同浓度(0 μmol.L-1、6.25 μmol·L-1、12.5 μmol·L-1、25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1)DHA分别作用于...     

靶向HBx基因shRNA载体稳定表达人肝癌细胞的建立

本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H,应用免疫荧光法初步研究HBx表达,并从基因组中克隆HBx基因,采用RNA干扰(RNAi)技术,构建靶向该HBx基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,通过转染和筛选,研究shRNA载体在MHCC97-H细胞中稳定表达对HBx基因表达的影响,最终构建稳定表达靶向整合HBx基因的shRNA载体的人肝癌细胞模型,为进一步研究构建平台.     

酒精性肝硬化与乙肝肝硬化的临床特征比较及防治

目的探讨酒精性肝硬化与乙肝肝硬化在临床特征上的区别,并提出防治建议。方法选取该院在2014年7月‐2015年7月收治的38例酒精性肝硬化患者为观察组,选取同期在该院治疗的38例乙肝肝硬化患者为对照组,分别对两组患者的各项临床特征进行对比分析,并总结出防治措施。结果两组患者在临床症状表现上脾肿大发生率比较差异无统计学意义(P0.05);两组患者在临床症状表现上肝肿大、黄疸、蜘蛛痣、腹胀以及食欲减退率比较差异均有统计学意义(P0.05);两组患者的胆石症、肝性脑病、肝源性糖尿病、肝肾综合征及消化道出血发生率比较差异均无统计学意义(P0.05);观察组患者急性胰腺炎发生率为13.16%(5/38),明显高于对照组患者的2.63%(1/38)(P0.05);两组患者因上消化道出血、原发性肝癌、肝性脑病、肝肾综合征、胆石症及急性胰腺炎死亡占组内死亡患者中的比例比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论酒精性肝硬化与乙肝肝硬化的临床特征区别主要存在于临床症状表现及并发症中,临床根据患者特征给予有针对性的防治措施可以明显提高防治效果。