前列腺特异性抗原相关参数在前列腺活检策略中的价值：单中心回顾性研究

［摘要］　目的　根据前列腺特异性抗原（PSA）相关参数评估6针法和12针法两种活检策略的效果,为患者提供合适的个体化活检策略。方法　回顾性分析2013年3月至2019年11月在该院接受前列腺活检的525例疑似前列腺癌并接受前列腺穿刺活检患者的资料,比较不同穿刺策略的穿刺阳性率和高评分肿瘤检出率。结果　本研究共纳入525例患者,170例诊断为前列腺癌。其中331例血清总前列腺特异性抗原（tPSA）<20 ng/ml。当tPSA<20 ng/ml且前列腺体积（PV）≤60 ml时,12针法活检的穿刺阳性率高于6针法活检;当tPSA<20 ng/ml且前列腺特异性抗原密度（PSAD）≥0.15 ng/（ml·cc）时,12针法的穿刺阳性率也高于6针法。12针法活检在tPSA<20 ng/ml且经直肠超声（TRUS）阴性者中可发现更多的高评分肿瘤。此外,在tPSA<20 ng/ml且PV≤60 ml的患者中,12针法活检的高评分肿瘤检出率更高。结论　对于tPSA<20 ng/ml的患者,当PV≤60 ml、PSAD≥0.15 ng/（ml·cc）或合并正常超声结果的患者,推荐12针法活检方案。     

人前列腺癌细胞PFKFB4基因RNA干扰慢病毒构建与鉴定

目的 构建人前列腺癌细胞PFKFB4基因短发夹RNA(shRNA)干扰慢病毒载体,建立稳定干扰的人前列腺癌细胞株。方法 通过GenBank检索人PFKFB4基因序列,根据shRNA引物设计原则,设计并合成PFKFB4 shRNA序列,并与携带绿色荧光蛋白序列的LV3载体连接,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒系统共转染293T细胞,收集病毒。使用逐孔稀释滴度测定法对慢病毒滴度进行测定。将LV3-PFKFB4 shRNA慢病毒载体感染人前列腺癌细胞设置为空载的LV3 Negative Control组（LV3-NC组）、空白对照组（Blank组）和LV3-shPFKFB4组。采用RT-PCR检测人前列腺癌细胞PFKFB4 mRNA水平。结果 重组质粒测序结果显示LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度为1×108TU/mL。RT-PCR结果显示,与LV3-NC组和Blank组相比,LV3-shPFKFB4组 PFKFB4 mRNA水平显著降低（P＜0.001）,而LV3-NC组与Blank组 PFKFB4 mRNA水平比较差异无统计学意义(P=0.271)。结论 LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构成功,同时获得稳定感染的人前列腺癌细胞株。     

PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定

［摘要］　目的　构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法　在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度。将构建的慢病毒感染PC-3细胞,采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应。结果　测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,慢病毒滴度为1×10⁸ TU/ml。real-time RT-PCR结果显示,LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达（P<0.05）。结论　成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体,获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株,为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础。