| PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定 |
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| 引用本文： | 郝 南,农德勇,李 钻,林俊浩,黄桂海,李锡明,李 伟.PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定[J].中国临床新医学,2021,14(8):773-778. |
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| 作者姓名： | 郝 南 农德勇 李 钻 林俊浩 黄桂海 李锡明 李 伟 |
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| 作者单位： | 530021 南宁，广西壮族自治区人民医院泌尿外科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（编号：81460387） |
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| 摘 要： | ［摘要］ 目的 构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体，鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法 在GenBank数据库检索PDK1基因序列，参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列，酶切过表达用载体LV3，纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞，测定病毒滴度。将构建的慢病毒感染PC-3细胞，采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应。结果 测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，慢病毒滴度为1×108 TU/ml。real-time RT-PCR结果显示，LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达（P<0.05）。结论 成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体，获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株，为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础。
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| 关 键 词： | RNA干扰 3-磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶-1 转染 前列腺癌 慢病毒载体 |
| 收稿时间： | 2021/6/1 0:00:00 |
Construction of PDK1 gene shRNA lentiviral vector and identification of its interference effect |
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| HAO Nan,NONG De-yong,LI Zuan,et al..Construction of PDK1 gene shRNA lentiviral vector and identification of its interference effect[J].Chinese Journal of New Clinical Medicine,2021,14(8):773-778. |
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| Authors: | HAO Nan NONG De-yong LI Zuan |
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