多重斑点金免疫法快速检测乙型肝炎病毒抗－HBs，抗－HBe和抗－HBc抗体

多重斑点金免疫法快速检测乙型肝炎病毒抗－ＨＢｓ，抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ抗体肖乐义，阎小君，陈远鑫，苏成芝，徐德忠，李陕区，阎永平，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３全军基因诊断技术应用研究所流行病学教研室）关键词斑点金免疫法，乙型肝炎...     

荧光偏振检测HBV DNA C区BCP双突变

目的：建立简便、灵敏的HBV DNA序列中BCP双突变点的检测方法．方法：采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测．首先对HBV C区基因进行PCR扩增，然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交，使探针的3’端可以在DNA聚合酶的催化下，依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP，然后检测该3’端带有荧光素的探针，根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸．结果：该方法可以检测出HBV基因序列中BCP双突变核苷酸类型以及检测1个拷贝的模板，并且可以从BCP野性株DNA序列中检出5％BCP双突变DNA序列．结论：该技术可以检测血清中HBV DNA C区BCP双突变．     

Detection of thiopurine s-methyltransferase mutations by template directed determinator in incorporation with fluorescence polarization （TDI-FP）

Objective: To develop a new method for the detection of TPMT gene mutations and determine the frequencies of four TPMT alleles, TPMT^*1,^*3A,^*3B and ^*3C in a healthy Chinese population. Methods:A TDI-FP assay system was set up in out lab. To evaluate this system, 220 healthy individuals were analyzed for the polymorphic sites at positions 460 (G→A)and 719 (A→G)of the TPMP gene using our new TDI FP method. Results:Three TPMP *3C(G^460→G^719) heterozygotes were identified, TPMP ^*3A and TPMP ^*3B were not found. All mutations were confirmed by conventional DNA sequencing analysis. Conclusion:TDI-FP method has proven to be very efficient as a rapid and accurate approach for TPMP genotyping. TPMP ^*3C was the only polymorphism identified in this clinical samples we have registered.     

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的　建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法　用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论　该方法简单、灵敏、特异 ,适用于临床进行大样本核酸检测     

DNA随机扩增多态性分析技术在枸杞道地药材鉴别中的应用

目的：对宁夏和内蒙两个地区的枸杞DNA进行分子标记分析，获得DNA指纹谱。方法：用随机扩增多态DNA（RNAD）标记方法对宁夏和内蒙不同来源地的枸杞进行遗传多样性分析。结果：用RAPD标记方法可以从DNA分子水平看出宁夏枸杞与内蒙枸杞的差异。结论：本法可为枸杞道地品种鉴别提供依据。     

反向荧光偏振（FP）检测血清中HBV多聚酶基因突变

目的:建立简便的HBV多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法.方法:利用pfu酶的3'-5'外切校正功能和荧光偏振光检测技术进行点突变的检测.首先PCR扩增HBV多聚酶基因,然后用3'标记荧光分子FAM的探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针3'第一个碱基与靶序列中待测点的碱基配对.若碱基配对正确,pfu酶可以沿探针的3'端延伸;若碱基配对错误,pfu酶须将探针3'标有荧光分子的核苷酸切掉,然后再沿探针3'端延伸.由于第一种情况,荧光分子与DNA链相连,分子量增加,则荧光偏振光值增大;而第二种情况,荧光分子与探针分离,荧光分子的整体分子量减小,则荧光的偏振光值减小,这样可以通过荧光偏振光值的大小判断待测点核苷酸的改变.结果:该方法可以检测出HBV多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型,可以检测1×10~1个拷贝的模板量.对30例经过6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测,检测出其中有3例是甲硫氨酸(M)密码子ATG中的A→G变异;2例是ATG中的G→C变异;1例是ATG中的C→T.结论:该技术可以对血清中HBV多聚酶基因序列中点突变以及其他基因突变进行检测.     

PCR法从痰液中快速检测结核分枝杆菌

目的：建立一种从痰液中检测结核分枝杆菌简便,快速且灵敏的方法。方法;用碱液化,水洗和Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００热裂解法从痰液中制备结核分枝杆菌ＤＮＡ,进行ＰＣＲ反应,并将该方法同其它几种方法进行比较。结果：该方法同抗酸性染色镜检法有显差异,同酚／氯仿法具有的灵敏度,结论：用该方法从痰液中检测结核分枝杆菌具有灵敏,简便和快速等特点。     

与HBV进入细胞有关的细胞膜分子

本文对近年有关HBV进入细胞的分子机制的研究做一综述，主要介绍了新发现的与HBV进入细胞有关的细胞膜分子和HBV包膜蛋白的水解机制。     

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法.方法用荧光偏振技术检测102例乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,并与多聚酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)方法作比较.结果该方法可以检测出1×101拷贝的HBV DNA模板,CV为6.44%,对102例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为100%(40/40);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为81.8%(27/33);HBsAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为72.4%(21/29),其余为阴性.30例非乙型肝炎患者血清中HBV DNA的检测结果均为阴性.结论该方法简单、灵敏、特异,适用于临床进行大样本核酸检测.     

荧光偏振检测血清中HBV 多聚酶基因突变

目的建立简便、多重HBV 多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法.方法采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测.对HBV多聚酶基因进行PCR扩增,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针的3′可以在DNA聚合酶的作用下,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP,然后检测该3′端带有荧光素的探针,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度判定待测点是何种核苷酸.结果该方法可以检测出HBV 多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型,能检测1×101个拷贝的模板量.对30例经过6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测,检测出其中有3例是甲硫氨酸(M)密码子ATG中的A→G变异;2例是ATG中的G→C变异;1例是ATG中的G→T.结论该技术可以对血清中HBV 多聚酶基因序列中点突变以及其他基因突变进行检测.