巢式聚合酶链反应扩增幽门螺杆菌尿素酶基因

选用位于幽门螺杆菌（Ｈｐ）尿素酶Ｂ基因上３个引物组成的巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ），成功地对Ｈｐ标准菌株及２１４例临床标本进行了扩增，并对样品的准备、ＰＣＲ反应物的组成及ＰＣＲ循环条件方面作了深入的研究，简化了操作程序，缩短了操作时间，降低了消耗。与既往所用的尿素酶试验及Ｗａｒｔｈｉｎ－Ｓｔａｒｒｙ银染色进行比较，显示其具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速且准确等特点，可作为常规检查在临床应用。     

胃粘膜组织中Hp的感染与癌基因ras及抑癌基因p53、p16的关系

胃粘膜组织中Ｈｐ的感染与癌基因ｒａｓ及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６的关系张沥１阎小君２白西平１韩锋产２张玲霞１苏成芝２Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａ／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ／ｅｄ...     

斑点金免疫渗滤试验快速检测抗Hp细胞毒素相关蛋白A抗体

目的建立快速检测抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）的斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）．方法将ＣａｇＡ抗原点于硝酸纤维素膜上，然后依次加入患者血清及用抗人ＩｇＧ抗体标记的胶体金颗粒，如血清中存在抗ＣａｇＡ的ＩｇＧ，在膜上便出现一个红色斑点．结果ＤＩＧＦＡ仅需几分种便可完成．当用ＤＩＧＦＡ及ＥＩＡ对１０８份血清进行检测时，两种方法之特异性及敏感性相当．当以聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测胃粘膜组织中ＨｐＣａｇＡ的结果作为参照时，ＤＩＧＦＡ的特异性及敏感性分别为９８％（５７／５８）和９４％（４５／４８）．结论ＤＩＧＦＡ特异性强，敏感度高，操作快速且简便，在ＣａｇＡ阳性Ｈｐ感染的检测方面有广泛应用前景     

用单表位合成肽抗原荧光偏振免疫法检测抗幽门螺旋杆菌尿素酶的抗体

目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescencepolarization,FP)的抗体检测方法。方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果。分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响。分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC)分析。结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmol/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1∶25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果。与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%。结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景。     

宫颈癌与HLA等位基因DQB1*03、DR15的相关性研究

目的: 探讨我国陕西地区宫颈癌的发生与人类白细胞抗原(HLA)-DQB1*03、DR15等位基因的相关性.方法: 采用序列特异性引物的聚合酶链式反应(PCR-SSP)方法,扩增HLA等位基因DQB1*03、DR15的目的DNA片段(分别为79、197 bp),分析两对等位基因在陕西地区宫颈癌患者和正常人中分布频率的差异.结果: 45名宫颈癌患者组中DQB1*03等位基因频率显著高于50名健康对照组,DR15等位基因频率在两组中的分布无显著差异.结论: HLA等位基因DQB1*03可能与宫颈癌的发生具有相关性,DR15可能与宫颈癌的发生不存在关联.     

幽门螺杆菌vacA基因毒性相关片段原核表达载体的构建和表达

目的 构建幽门螺杆菌（Hp)vac A基因片段原核表达载体并进行表达。方法 采用PCR技术,扩增Hp vac A基因的1个片段B,并克隆入pGEM－3Zf(-)质粒。测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构建重组表达载体pRSETA-B。结果 经过转化E.coli BL21 DE3(plysS)后,诱导表达出相对分子质量（Mr)为33000的蛋白。SDS－PAGE分析显示,表达量占全菌总蛋白质的47．8％。清中目的蛋白占全菌总蛋白的10．9％。ELISA和Western blot分析表明,表达蛋白能与免抗Vac A多抗结合。结论 成功地构建原核表达载体pRSETA-B,为进一步探讨该片段的生物学活性,以及临床上通过检测患者血清预测Hp的感染提供了实验依据。     

用PCR产物的探针杂交显色法快速检测血清中HBV DNA

0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面，但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低，要求PCR循环的次数应足够多，且操作繁琐，不适宜于大量标本的检测．我们在降低常规PCR循环次数的基础上，通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析，建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法．回材料和方法1．1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪（美国）；DG3022型酶联检测仪（华东电子管厂）；dNTPS（Pr。mega）；TaqDNA聚合酶（Promega）；亲和素（MW：66000，原平生物工程公司…     

采用改进的表示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义

建立优化的差示ＰＣＲ条件：运用建立的条件分离胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ－１细胞株之间的差异表达基因；根据获取的序列，设计引物并运用于检测胃癌组织、血活检胃粘膜标本，拟筛选出检出率与符合率高的数对引物，建立胃癌基因诊断方法。方法：以ＧＣ７９０１与ＧＥＳ－１细胞株为研究对象，探索ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ 最佳反应条件，运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因；以回收的片段作条件分离细胞打点杂交证实为真     

幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A的表达纯化及其临床研究

目的　 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法　构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果　重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论　我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发