重组人白细胞介素11加速无血缘关系脐血移植血小板植入的临床研究

目的观察重组人白细胞介素11（rhIL—11）加速无血缘关系脐血移植血小板植入的情况。方法9例患者中成人6例，儿童3例。接受HLA0～2个位点不合的脐血移植。成人给予双份脐血移植，儿童给予单份脐血移植。预处理采用BU／CY或CY／TBI方案，同时加用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）。采用环孢素联合短疗程甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病（GVHD）。移植后1天开始皮下注射rhIL-1150mg·kg^-1·d^-1和G—CSF5mg·kg^-1·d^-1促进造血重建。结果9例患者平均年龄22．3岁，平均体重52．3kg。9例患者8例白细胞植入，中性粒细胞〉0．5×10^9／L的中位时间为21．3（14～37）天；7例患者血小板植入，血小板〉20×10^9／L的中位时间为25（18～36）天。急性GVHD（aGVHD）发生率为42．9％，均为Ⅰ度。慢性GVHD（cGVHD）发生率为33．3％，为局限型。死亡3例，死亡主要原因为感染。存活的6例患者，中位随访时间为7个月，均为无病存活。预计1年总生存率为77．8％，2年总生存率为52．2％。使用rhIL-11的8例患者中5例（62．5％）出现渗漏综合征。所有患者在采取包括紫草的综合防治措施后均可耐受rhIL-11的治疗。结论rhIL-11可能有利于加速血小板的植入，降低严重aGVHD的发生率。渗漏综合征是主要的不良反应，在采取包括紫草的综合防治措施后患者耐受较好。     

血浆炎性趋化因子CCL-2／MCP-1水平与造血干细胞移植后aGVHD及特发性肺炎综合症相关性研究

本研究探讨CCL-2／MCP-1血浆水平在异基因造血干细胞移植前后的变化，以了解该趋化因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）和特发性肺炎综合症（IPS）发生、发展中的作用。选择22例异基因造血干细胞移植病例为研究对象，其中无／度aGVHD14例，Ⅱ-Ⅳ度aGVHD8例，在22例中8例临床诊断为IPS。采用固相双抗体夹心酶联免疫吸附方法每周测定血浆CCL-2／MCP-1水平并分析造血干细胞移植前、aGVHD高峰时、aGVHD控制后或进展时（Ⅲ-Ⅳ度者）CCL-2／MCP-1水平与aGVHD之间的关系，同时分析移植过程中CCL-2／MCP-1动态变化和IPS的关系。结果表明，Ⅱ-Ⅳ度aGVHD高峰时血浆CCL-2／MCP-1水平较移植前明显升高（p〈0．05），aGVHD被控制时CCL-2／MCP-1水平下降至移植前水平（p〈0．05），病情进展时CCL-2／MCP-1持续升高（P〈0．05）。发生aGVHD和／或IPS的患者CCL-2／MCP-1水平明显高于既无（或轻度）aGVHD又无IPS的患者（p=0．001）。临床诊断为IPS的患者。在移植过程中CCL-2／MCP-1水平明显升高（P=0．006）。结论：CCL-2／MCP-1血浆水平与aGVHD的发生有一定的相关性，但与IPS的发生明显相关，表明CCL-2／MCP-1在aGVHD及IPS发生中发挥作用。     

人鼠嵌合型CD20单克隆抗体增强树突状细胞诱导抗淋巴瘤CTL免疫效应研究

本研究利用人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤的靶向作用特点和其人源Fc段结合人树突状细胞（DC）的特点，探讨抗CD20单克隆抗体激发人DC呈递肿瘤抗原从而诱导抗淋巴瘤的细胞免疫效应。用人体外周血单个核细胞（MNC）体外诱导Dc生成。对高表达CD20的人淋巴瘤细胞株（Raji）分别进行抗CD20单克隆抗体单独作用（R组）、加热诱导凋亡（A组）、诱导凋亡同时加用抗CD20单克隆抗体作用（R＋A组）。经上述处理的肿瘤抗原分别负载于DC，应用透射电子显微镜观察DC对肿瘤抗原的吞噬作用，用抗原处理的DC进行自体混合淋巴细胞反应，应用ELISPOT分析效应细胞一干扰素产生和用MTT法分析效应细胞对Raji靶细胞的杀伤作用。结果表明：R组处理的DC无明显吞噬现象，A组中易见DC吞噬凋亡小体，而R＋A组中DC吞噬较多的细胞碎片。流式细胞术检测显示，3个实验组DC上的CD80、CD86、HLA．DR表达高于对照组，差别显著（P〈0．05），其中R＋A组的CD86表达阳性率明显大于R组和A组（P〈0．05）。淋巴细胞表面抗原检测结果显示，所有实验组CD8^＋细胞的比例均明显高于对照组（P〈0．05），且应用抗CD20单克隆抗体的实验组（R组和R＋A组）CD56^＋细胞数均有所增加，与不用抗CD20单克隆抗体组比较差别显著（P〈0．05）。ELISPOT方法证明，各实验组产生γ-干扰素的细胞数均高于对照组，且当效靶比为1：10时，R＋A组斑点数明显高于其它组（P〈0．05）。MTT法测定杀伤实验结果表明，各实验组对Raji细胞的杀伤率均较对照组增加，其中R＋A组的杀伤率高于R组和A组，具有显著统计学差异（P〈0．05）。结论：抗CD20单克隆抗体能够介导DC产生抗淋巴瘤效应，即激活并扩增肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK），抗CD20单克隆抗体同时加凋亡诱导处理肿瘤细胞作为抗原冲击树突状细胞，能进一步增强抗淋巴瘤的细胞免疫效应。     

血浆炎性趋化因子CXCL9/Mig水平与急性移植物抗宿主病关系的研究

研究血浆炎性趋化因子CXCL9／Mig在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前后的水平变化，以探讨该因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病中的作用。以35例异基因造血干细胞移植患者为研究对象，其中包括发生0-Ⅰ度aGVHD者13例，Ⅱ度aGVHD者12例，Ⅲ-Ⅳ度aGVHD者10例。采用固相双抗体夹心ELISA方法分别测定造血干细胞移植前、临床aGVHD发生前1周、aGVHD高峰时、aGVHD完全控制后血浆CXCL9／Mig水平。结果表明：中、重度aGVHD（Ⅱ-Ⅳ度）发生时血浆CXCL9／Mig水平明显升高（P〈0．001），且随aGVHD严重程度加重而增加；临床aGVHD表现出现前1周，血浆CXCL9／Mig水平已明显升高（P〈0．001）。血浆CXCL9／Mig水平与巨细胞病毒（CMV）感染等感染并发症无明显相关性（P〉0．05）。结论：CXCL9／Mig血浆水平与aGVHD的发生明显相关，表明该因子在aGVHD发生中发挥重要作用。异基因造血干细胞移植后动态观察血浆CXCL9／Mig水平变化可作为aGVHD早期诊断的有价值的指标，进而达到早期干预aGVHD提高异基因造血干细胞移植效果的目的。     

外周血CD34+细胞绝对计数可靠预示自体外周血干细胞采集效果

目的　为确定外周血CD34+细胞绝对计数能否可靠预示自体外周血干细胞的采集效果。方法　用流式细胞仪ProCOUNT方法对采集的 2 5份次移植物和采集当天外周血行CD34+细胞绝对计数 ,同时做外周血常规检查和移植物集落形成单位 (CFU)计数 ,每份次移植物以CD34+/kg ,单个核细胞 (MNC) /kg,粒 巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM) /kg ,红细胞集落形成单位 (CFU E) /kg等为指标 ,与患者采集当天的外周血CD34+细胞绝对计数、CD34+细胞百分比、WBC ,MNC ,中性粒细胞(NEU)或血小板 (PLT)等各项指标进行相关分析和逐步回归分析。结果　 ( 1)Spearman相关分析结果 :外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CD34+/kg高度相关 (r=0 790 ,P <0 0 0 1) ,外周血CD34+细胞百分比与移植物CD34+/kg相关 (r=0 6 17,P <0 0 5 )。外周血WBC、MNC、NEU、PLT或RBC与移植物CD34+/kg无关。外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CFU E相关 ,而与CFU GM无关。外周血MNC与移植物MNC/kg相关。 ( 2 )逐步回归分析结果 :移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 (P <0 0 0 1) ,而与外周血CD34+细胞百分比无关。结论　移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 ,外周血CD34+细胞绝对计数能够可靠预示自体外周血干细胞的采集效果     

转mdr1基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性

目的　将多药耐药基因 (mdr1)转入细胞因子诱导的杀伤 (cytokine inducedkiller,CIK)细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持肿瘤杀伤活性。方法　用IFN γ ,CD3单抗 ,IL 2 ,IL 1等细胞因子体外诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。采用电穿孔方法将mdr1基因表达质粒pHamdr转入CIK细胞。转染后 72h提取细胞总RNA ,DNA酶消化残留质粒DNA后进行RT PCR ,鉴定mdr1基因表达 ;流式细胞仪检测细胞膜耐药蛋白 (P gp)表达。四唑蓝比色法 (MTT)检测转基因后CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性 ;同时检测转染前后CIK细胞对MCF7细胞 (人类乳腺癌细胞系 )的杀伤活性变化。结果　转染mdr1后的CIK细胞mdr1mRNA阳性 ,P gp阳性的CIK细胞为 2 1%～ 37% (平均 2 7% )。转染后CIK细胞获得了多药耐药性 ,对阿霉素的IC50 值较转染前升高了 2 2 .3～ 4 5 .8倍 ,对秋水仙碱的IC50 值升高了 6 .7～ 11.35倍。转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无明显变化 (P >0 0 5 )。结论　CIK细胞转入mdr1基因后获得了多药耐药性 ,转染后的CIK细胞仍然保持原有的肿瘤细胞杀伤活性。     

市场乏力,如何突出重围——抗生素之市场销售及研发分析

抗生素市场正日趋成熟,过去5年的年平均增长率仅为4%。在现有市场机制以及制药工业以追求利益最大化的前提下,如何通过新药开发来突出重围成为各企业战略部署的重要考量。     

辉瑞肯将关闭特郡桑威奇研发中心急坏英国政府

<正>未来两年内,有2400名员工将离开辉瑞位于肯特郡英吉利海峡岸边的桑威奇研发中心。早在今年2月初,辉瑞就在去年第4季度和全年的业绩报告中指出,将在2012年底关闭位于肯特郡桑威奇的研发中心,该研发中心已有56年的历史。这一决定将取消辉瑞为英国研发人     

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的：分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B（major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A and B,MICA/B）的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法：用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶（ataxia telangiectasia mutated and Rad3 related kinase,ATM/ATR）,加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯（pynolidine dithiocarbamate,PDTC）抑制核因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）,观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果：三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100 μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到（1.68±0.17）、 (2.54±0.25)、 (3.42±0.15)倍（P<0.05）;MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍（P<0.05）。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高（P<0.05）。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高（P<0.05）。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达（P<0.05）,且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、 5、 10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍（P<0.001）,MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍（P<0.05）,MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍（P<0.001）,表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC（10、50、100 μmol/L）,MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制（P<0.05）,提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论：拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。     

8－氯腺苷的抗肿瘤作用研究

采用国内合成的８－氯腺苷经体内、外实验研究，结果表明，用１００ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）×７剂量，可使小鼠肝癌实体瘤Ｈ＿２２抑制率达７１．７％±１３．３％腹腔注射（ｉｐ）和６６．１％±４．４６％静脉注射（ｉｖ），使白血病Ｌ１２１０荷瘤小鼠的生命延长率达１２４．Ｏ％±２２．１％（ｉｐ）和１０４．２％±２０．１％（ｉｖ）。体外实验显示，８－氯腺苷对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ＿５６２以及人胃癌细胞系ＭＧＣ８Ｏ－３均有明显抑制生长作用，其ＩＣ＿５０值分别为：１．８μｍｏｌ／Ｌ、４．２μｍｏｌ／Ｌ和１．５６μｍｏｌ／Ｌ。该药采用腹腔一次注射测定小鼠的ＬＤ＿５０为：１０２５．０±５２．４ｍｇ／ｋｇ；大鼠的ＬＤ＿５０为：７９３．４±７０．７ｍｇ／ｋｇ，表明其急性毒性很低。