弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。     

从临床案例中研究临床与微生物检验相互沟通的重要性

通过分析北京大学深圳医院微生物检验专业最近一年与临床沟通的案例,采用病例介绍和案例分析,研究临床与微生物检验相互沟通的重要性。通过临床与微生物检验相互沟通,微生物检验人员针对特殊病例特殊标本,改进检验流程,找到临床久治不愈的疑难感染病例的真正病原微生物:分枝杆菌、毛霉和放线菌;临床及时修订治疗方案,避免了误诊误治及延误病情。因此,加强临床与微生物检验相互沟通,开拓微生物检验人员的检验思维,发扬医务人员锲而不舍的专业精神,对临床疑难感染病的治疗成功有着重要的意义。     

162例次腹膜透析相关性腹膜炎病原学分析

目的研究该院腹膜透析相关性腹膜炎透出液的病原菌培养鉴定结果、涂片革兰染色镜检结果、耐药情况,为腹膜透析相关性腹膜炎的临床诊断、治疗、预后及实验室检查提供数据支持。方法回顾性分析2014年1月至2019年4月该院收治的124例腹膜透析相关性腹膜炎患者共162次透出液的病原菌分布、涂片革兰染色镜检结果、耐药情况。结果 162例次透出液检测中,115例次透出液培养阳性,阳性率71.0%。培养出126株病原菌,其中83株革兰阳性球菌(65.9%),34株革兰阴性杆菌(27.0%),6株真菌(4.8%),2株革兰阴性球菌,1株革兰阳性杆菌。115例次透出液培养阳性的腹膜炎患者中有78例次同步送检涂片革兰染色,其中34例次阳性,阳性率43.6%。在病原菌耐药性方面,48.0%葡萄球菌耐苯唑西林,4.8%链球菌耐青霉素,54.5%肠杆菌目细菌耐第3、4代头孢菌素。结论在该院,腹膜透析相关性腹膜炎病原菌以革兰阳性球菌为主;在透析相关性腹膜炎诊治中,应重视透出液涂片革兰染色镜检;应根据病原菌监测情况进行经验性抗菌药物的选择。     

国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定性能评估

目的 评估国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统microTyper MS鉴定革兰阴性菌的性能.方法 使用国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS与进口质谱系统VITEK MS系统同步鉴定该实验室储存的标准菌株及2018年6月至2019年6月临床分离的革兰阴性菌株.鉴定结果不一致时,使用表型试验或16 s rDNA测序进行确认,以此评估microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定能力.结果 纳入鉴定的革兰阴性菌株一共45属4509株.VITEK MS系统准确鉴定4419株,准确率为98.0％;microTyper MS准确鉴定4405株,准确率为97.7％.结论 microTyper MS在革兰阴性菌鉴定方面具有与VITEK MS系统相仿的临床细菌鉴定能力.     

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化

目的　构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。　方法　用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a( ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。　结果　从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。　结论　利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。     

SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫

目的构建SARS病毒核衣壳蛋白（N）的真核表达质粒，并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段，定向克隆入真核表达栽体pVAC，构建pVAC-N重组质粒；大量制备该重组质粒，经基因枪腹部皮内注射免疫BALB／c小鼠三次，间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N，免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体，为SARS疫苗的进一步研究打下基础。     

深圳市重点人群肝吸虫病感染状况分析

目的了解深圳市重点人群肝吸虫病感染状况并探讨感染危险因素,为制定肝吸虫病防治对策提供依据。方法对2008年5月～2009年5月来诊的肝吸虫病症状可疑、血液嗜酸性粒细胞增高、有生食淡水鱼虾习惯的重点人群进行肝吸虫病血清学检测和相关知识行为学调查。结果共调查1382名6～65岁重点人群,检出肝吸虫IgG抗体阳性373人（26．98％）。男性的感染率为27．89％（260／932）,女性感染率为25．11％（113／240）,男女性别间比较无统计学差异。不同年龄组人群感染率不同,最高感染率的年龄组分布在31～40岁．知识行为学调查显示,59％的被调查者不了解肝吸虫病及其传播途径,68％的被调查者每月至少吃1次淡水生鱼,11％的家庭生熟刀具未严格区分。结论深圳市重点人群肝吸虫病感染阳性率高于一般人群,加强重点人群的监测和干预对于肝吸虫病的预防和控制有着重要的意义。     

结核病疫苗的研究进展

由于全球结核病疫情呈上升趋势,而现今唯一使用的结核病疫苗—卡介苗存在许多不足之处。因此,迫切需要开发新型疫苗用以防治结核病。本文从基因工程重组活疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、营养缺陷型疫苗等方面介绍了目前新型结核病疫苗的研究进展。