结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究

目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b（＋）上,构建重组质粒PET-22b（＋）/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附（ELISA）试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21（DE3）中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。     

结核病的特异性免疫诊断的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种呼吸道传染性疾病,是现代人类最主要的致死性传染性疾病。目前在发展中国家,结核发病率仍在持续增长,在发达国家病人也有所增加,主要见于高危人群（感染HIV的病人、慢性酒精中毒者、无家可归     

结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达

目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。     

游泳池水中尿素测定的两种比色管比较

我国已将尿素列入了游泳池水质监测指标。过去的尿素检测方法比较复杂,而且重现性也差。而二乙酰-肟比色定量法虽然操作简单、灵敏度及重现性较优,但该方法要求使用棕色比色管,否则因光线影响检测值。为了观察在尿素检测过程中的避光及棕色管的使用对检测结果的影响,做了如下实验。     

103例心脑疾病等患者血浆D—二聚体的检测

<正> 在血浆中,纤维蛋白降解产物水平的增加,说明在微血管的某些地方有过量的纤维蛋白产生,过量的纤维蛋白可被纤溶酶降解形成各种可溶性的降解产物片段。其片段中包括有D-二聚体(D-Dimer)存在,当血管内血栓形成时,血液中产生大量的交联纤维蛋白,此时纤溶酶开始水解交联纤维蛋白而产生特异性的降解产物D-二聚体。纤溶酶的活性越增强,血浆中D-二聚体越增高。因此,检测血浆中D-二聚     

止血参数在急性脑梗塞诊治中应用价值的探讨

本文报告了153例急性脑梗塞病人,男96例,女57例,观察了这些病人以下实验室检查指标:如,血浆凝血酶原时间(PT),国际标准化比值(INR),活化部分凝血酶时间测定(APTT),凝血酶时间测定(TT),纤维蛋白原测定(FiB),血管性假血友因子测定(VWF:Ag)及血小板计数(PLT)等。并与正常人(对照组)的上述检测项目进行比较分析,筛选出临床价值较高的指标作为急性脑梗塞患者的诊断指标。     

紫外分光光度法测定注射用前列腺素E1的含量

目的:采用碱异构化法对注射用前列腺素E1进行含量测定.方法:紫外分光光度法,1.0mol·L-1氢氧化钾甲醇液为异构化反应溶媒,检测波长为278nm.结果:检测线性范围2～10μg·ml-1,r=0.9999,平均回收率为99.8%,RSD=0.89%.结论:本法检测结果准确、可靠,可用于控制注射用前列腺素E1的质量.     

醋酸麦迪霉素干混悬剂溶出度测定方法的研究

目的:研究测定醋酸麦迪霉素干混悬剂溶出度的方法.方法:采用桨法,以磷酸盐缓冲液(pH6.8)为溶剂,转速100r·min,紫外分光光度法232nm波长处测定吸收度.结果:30min的溶出量不少于标示量的70%,在0.08～0.4mg·ml-1范围内呈良好的线性关系,r=0.9993(n=5).结论:本方法准确可靠,能满足质量控制的要求.     

结核分枝杆菌38 ku蛋白的制备及其抗原性研究

目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌38ku蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法2003年2月至2004年3月在中国药品生物制品检定所菌苗室以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应(PCR)方法对38ku蛋白基因进行扩增,以PET-30a( )为载体构建重组质粒,在大肠埃希菌中表达38ku蛋白,通过金属离子螯合亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析该重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的38ku蛋白重组质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,经过一步金属离子螯合亲和层析后得到纯度为92.7%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感度和特异度分别为80.5%(33/41)和96.0%(25/26)。结论大肠埃希菌工程菌以包涵体的形式表达38ku蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。     

关于医院污水处理问题的探讨

一些文献资料多介绍医院污水的生物污染及致病微生物的检出情况。所以要求医院污水需进行处理的呼声较大,因而国家制订了医院污水排放标准及管理办法,要求医院均建立污水处理设施。但是对医院污水的特殊要求的想法,不过是人们感情上的推断。