皮下种植复方羟磷灰石钛尖根管充填材料的组织学反应

目的：观察复方羟磷灰石钛尖的组织相容性。方法：将填有实验材料或ｏｘｐａｒａ牙胶尖的硅胶管埋植于猴皮下组织内，３个月后，镜下观察组织学反应。结果：实验组不论充填程度如何，均无明显炎症或反应甚微，而对照组的反应较大。结论：复方羟磷灰石钛尖是一种良好的生物相容性根管充填料。     

IL-1β对人牙周膜纤维细胞的c-myc基因表达的调节

作者在研究了IL-1β对人牙周膜纤维细胞(humen periodontal ligament fi broblast,HPLF)DNA合成功能调节作用的基础上,采用核酸杂交,分子探针技术,动态观察了IL-1β(100u/ml)对该细胞的c-myc基因表达的影响,以期从基因水平探讨IL-1β促进人牙周膜纤维细胞DNA合成的作用机理以及IL-1β与尖周病、牙周病发病、修复的相互关系。结果发现,HPLF经IL-1β处理后,c-mgc基因表达信号显著增强。表明IL-1β具有促进HPLF的c-myc基因表达的作用;IL-1β诱导HPLF的DNA合成可能主要作用于细胞分裂的GO/G_1期;IL-1β在尖周病,牙周病的纤维化愈合过程中可能起着一定的积极效应。     

小鼠cbfa1多克隆抗体制备及在骨和牙胚中的表达

目的　制备cbfa1多克隆抗体并进行鉴定和效价分析 ,观察其在骨和牙胚中的表达情况。方法　用自制的融合蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ,提取小鼠牙胚、颅骨和肝脏组织的总蛋白进行westernblot ,同时采用免疫组化染色观察其组织表达特性。结果　cbfa1蛋白在小鼠颅骨和牙胚组织中均有表达 ,在人骨肉瘤细胞系中呈强阳性表达。在免疫组化和westernblot的有效作用滴度分别为 1:40 0和 1:10 0 0。结论　成功地制备了兔抗小鼠cbfa1多克隆抗体     

维生素D3衍生物对人成骨细胞生长和碱性磷酸酶活性的影响

目的：使用人胎成骨细胞（ＯＢ）为体外模型，观察了１，２５－双羟维生素Ｄ３〔１，２５（ＯＨ）２Ｄ３〕、２４，２５－双羟维生素Ｄ３［２４，２５（ＯＨ）２Ｄ３）］对ＯＢ生长和代谢的影响。方法：用ＡＬＰ测定法和Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白含量法。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３在浓度为１０８ｍｏｌ／Ｌ时，刺激碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的活性。但抑制ＯＢ的生长。２４，２５（ＯＨ）２Ｄ３在１０－８ｍｏｌ／Ｌ时无上述作用。结论：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＢ的ＡＬＰ有直接的促活作用，其作用与时间相关。２４，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＢ的ＡＬＰ活性无关。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对人胎ＯＢ生长有抑制作用。     

永生化细胞株的建立

建立永生化细胞株是细胞生物学的新进展。除了自发性永生化,人们通常将外源性永生化基因,包括病毒、原癌基因和p53突变体,通过基因转染技术导入目的细胞内,建立永生化细胞株。永生化的机理基于细胞的M1/M2期模式。目前已建立起十余种口腔医学相关永生化细胞株,但它们具有一定的局限性。     

人重组成釉蛋白C端肽在大肠杆菌中的表达及初步纯化

目的 :在大肠杆菌中表达人重组成釉蛋白C端肽 ,并对重组蛋白进行纯化 ,为进一步制备抗人成釉蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法 :将编码人成釉蛋白C端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET -A上 ,构建表达质粒 pRSET -A -AMBN ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni -NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌在IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白带 ,相对分子量 (Mr)为 5 2× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度大于 95 %的人重组成釉蛋白C端肽。结论 :获得Mr为 5 2× 10 3 的人重组成釉蛋白C端肽。     

3株产黑色素类杆菌内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞细胞毒作用

研究发现:3株感染根管内产黑色素类杆菌、牙髓类杆菌、产黑类杆菌、中间类杆菌的内毒素脂多糖,对体外培养的人牙髓、牙周膜成纤维细胞具有细胞毒作用,其最低抑制浓度为100ug/ml,并表现出时间依赖性和浓度依赖性。     

牙本质涎蛋白转基因小鼠的建立和转基因表达的初步分析

目的:构建牙本质涎蛋白(DSP)转基因小鼠,并对转基因表达进行初步RT-PCR分析。方法:将pcDNA3.1载体中的CMV启动子替换为启动子cβ-actin,构建载体pcDNA3.1-CX,然后将PCR获得的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3.1-CX中,构建DSP转基因载体pcDNA3.1-CX-dsp;将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,将受精卵移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后,用PCR及Southern印迹检测阳性小鼠,并用RT-PCR对其中一小鼠的F1代进行转基因表达分析。结果:共移植717枚注射过的受精卵至29只受体鼠,移卵后产仔67只,阳性4只。检测到53号小鼠F1代外源性DSP的表达。结论:通过显微注射方法,成功获得了DSP转基因小鼠,并证实外源性DSP可在53号小鼠F1代获得表达。     

核心结合因子α1诱导人牙乳头细胞矿化的相关蛋白表达

目的 在人牙乳头细胞中探讨核心结合因子α1(core binding factor α1，cbfal)能否调控矿化相关蛋白的表达。方法 体外培养人牙乳头细胞，转染peDNA3-cbfal重组质粒，稳定表达cbfal后检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)和骨钙素(osteoealcin，OC)含量，同时采用免疫组化、免疫印迹和PCR等方法观察骨桥素(osteopontin，OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein，BSP)、骨连素(osteonectin，ON)、牙本质基质蛋白(dentin matrix protein 1，DMP1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)的表达。结果 建立了稳定表达cbfal基因和蛋白的人牙乳头细胞模型PC-3，发现转染后细胞的ALP和OC含量明显增高，OPN、BSP、ON、DMP1的表达也明显增高，但未发现牙本质特异性蛋白DSP及其编码基因DSPP的表达。结论 在人牙乳头细胞中，cbfal能上调ALP和OC含量，诱导多种矿化组织特异性蛋白的表达，在牙齿发育矿化中有重要作用，提示它与牙乳头细胞分化为成牙本质细胞的启动有关。