四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的作用

背景:一些实验证明多糖在感染、炎症、细胞间黏附和信号传导、免疫识别、细胞增殖分化及维持细胞正常结构和功能生理、病理等方面均起重要作用。但植物多糖对胃肠道黏膜的保护作用有待进一步研究。目的:观察不同浓度的四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。设计:观察对比实验。单位:广东省中医院中心实验室。材料:①细胞株:正常大鼠小肠上皮细胞株IEC-6(ATCCCatalogNo.RL-1592)由美国ATCC(AmericanTypeCultureCollection)购得,主要来源于小肠隐窝细胞。②试剂和药品:DMEM培养基,牛胰岛素,庆大霉素,胎牛血清,DPBS均为GIBCO公司产品;细胞增殖试剂盒(MTT)为Roche公司产品;消炎痛为Sigma公司产品。四君子汤总多糖按药典处方比例取党参,白术,茯苓和甘草适量,加水浸泡后,煮沸提取4h,重复1次,合并提取液,减压浓缩,高速离心除去不溶物,提取液置玻璃纸中逆向流水透析2h,再于提取液中加乙醇至浓度约80%,保存过夜后分取沉淀,合并所有沉淀,采用Sevag法除去粗多糖中的蛋白,冻干后得到的总多糖。方法:①将IEC-6细胞株于干冰中取出,迅速放入37℃水浴中解冻后,加入已装有DMEM培养液的T-150培养瓶后放入CO2培养箱中,于37℃,饱和湿度,体积分数为0.05的CO2环境下培养。细胞隔天换液1次,每5～7天进行传代,传代比例为1∶7。第15～20代细胞用于实验。②IEC-6细胞以1×104/孔的浓度接种于96孔细胞培养板上,接种后6h,各培养孔内依次加入浓度为50,100,200mg/L四君子汤总多糖,即为四君子汤总多糖3个剂量组。每天定时取出1板,按试剂盒说明书以MTT法进行细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组,在相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。③将IEC-6细胞按1×104/孔的浓度接种于96孔细胞培养板中,接种后次日更换以无血清培养液DMEM,24小时后,各培养板中分别加入消炎痛以及四君子汤总多糖,其中,消炎痛使用浓度为40mmol/L,即为消炎痛组。四君子汤总多糖使用3个剂量分别为50,100,200mg/L,即为四君子汤总多糖50,100,200mg/L组。药物作用20h后,按试剂盒使用说明书进行MTT法细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组,在各相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。主要观察指标:MTT法测定四君子汤总多糖不同作用时间对IEC-6细胞生长的影响结果;MTT法测定四君子汤总多糖对消炎痛所致的IEC-6细胞生长抑制的影响结果。结果:四君子汤总多糖不同剂量于不同的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用;IEC-6细胞在给予消炎痛40mmol/L作用24h后,细胞增殖的吸光度明显低于正常对照组(0.17±0.02,0.31±0.03;P<0.01)。当四君子汤总多糖使用浓度为100mg/L时,IEC-6细胞的吸光度明显高于消炎痛组(0.25±0.04,0.17±0.02;P<0.01),虽然未达到正常IEC-6细胞吸光度的水平,但与正常组无明显差异(P>0.05)。结论:四君子汤总糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用,它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

三七叶皂苷酶水解产物的提取分离及结构鉴定

目的：对三七叶皂苷酶水解产物进行提取分离和结构鉴定。方法：在正交设计优选的酶解条件下，利用β-葡聚糖苷酶水解三七叶皂苷制备酶水解产物；大孔树脂法提取、柱层析法分离酶水解产物、光谱法确定酶水解产物的化学结构。结果：得到2种酶水解产物，经鉴定分别为人参皂苷C-K和人参皂苷-Mc。结论：利用大孔树脂提取及柱层析分离技术，可以实现三七叶皂苷酶水解产物的分离与制备。     

周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响

目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,其对上述细胞的抑制生长作用亦越明显。结论周细胞的缺失将导致色素细胞、巨噬细胞及胶质细胞的增殖,细胞间相互作用对于糖尿病视网膜病变的发生和发展是非常重要的。     

猪苓多糖对卡介苗刺激巨噬细胞表达前炎症细胞因子mRNA的影响

目的检测猪苓多糖（polyporus polysaccharide，PPS）协同卡介苗（bacillus calmette guerin，BCG）对巨噬细胞自介索-1β（Interleukin-lbeta，IL-1β）和肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α）mRNA表达的影响，研究其参与免疫启动的过程。方法将BCG或BCG加PPS作用于体外培养的小鼠巨噬细胞J774细胞株，运用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平。结果单用BCG或BCG和PPS合用刺激巨噬细胞后，IL-1β和TNF-53 mRNA表达水平较阴性对照组均显著升高。BCG和PPS合用，巨噬细胞IL-1βmRNA表达水平比单用BCG高，两者差异有显著性。同等剂量的情况下，单用BCG或BCG和PPS合用，两者TNF-α mRNA表达水平无明显差异。表达峰值时间：TNF-α为0．5h，IL-1β为3h。结论BCG可增强巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达，一定剂量的PPS能协同BCG提高IL-1β mRNA的表达，参与免疫启动反应。     

Eotaxin/CCR3在子宫内膜异位症不孕小鼠的表达及中药莪棱胶囊的干预作用

目的:通过建立子宫内膜异位症(EMS)导致不孕症小鼠模型,观察比较趋化因子EOTAXIN及其受体CCR3在子宫内膜异位症(内异症)怀孕鼠以及不孕鼠之间的差异,分析EOTAXIN/CCR3基因对内异症不孕的影响,并探讨中药莪棱胶囊的干预作用。方法:建立EMS小鼠模型,同时皮下注射乙烯雌酚。观察24周后,进行同笼交配以计算该模型不孕率,同时区分怀孕鼠以及不孕鼠。对不孕鼠口服给予莪棱胶囊进行治疗,4周后取材,采用荧光定量PCR法分别观察正常鼠、怀孕鼠、不孕给药鼠、不孕给水鼠子宫内膜中Eotaxin/CCR3的表达情况。结果:假手术组小鼠子宫内膜Eotaxin表达,以及CCR3基因表达均较低。EMS模型怀孕鼠子宫内膜Eotaxin/CCR3基因表达明显升高。但EMS模型不孕鼠子宫内膜Eotaxin,以及CCR3基因表达较怀孕鼠更加明显。在不孕鼠中,给予莪棱胶囊的小鼠,子宫内膜Eotaxin表达以及CCR3表达均较给水组降低。结论:EOTAXIN/CCR3可能直接参与了子宫内膜异位症导致的不孕症的病理过程。莪棱胶囊可直接下调不孕鼠子宫内膜EOTAX-IN/CCR3表达,而起到缓解炎症,改善内异症作用的。     

柴胡舒肝丸HPLC指纹图谱研究

目的:建立适用于柴胡舒肝丸的HPLC指纹图谱。方法:采用Zirchrom Kromasil C18色谱柱,以甲醇-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 ml·min-1,检测波长为294 nm,柱温为30℃。结果:以12批次样品为基础,进行指纹图谱分析,以黄芩苷作为内参比峰,确定24个共有峰,建立指纹图谱共有模式。对16批次样品进行相似度计算,结果在0.690~0.993之间,表明不同生产厂家的制剂存在差异。结论:该指纹图谱的建立为更全面地规范药材来源、有效监测产品的质量、保证临床用药的有效与安全提供了简单、实用的分析方法。     

高龄急性心肌梗死患者直接PCI治疗的安全性及近期疗效分析

目的探讨高龄(75岁以上)急性心肌梗死(AMI)患者行直接冠状动脉介入治疗(PCI)的安全性及住院期间的预后。方法将连续247名接受直接PCI治疗的ST段抬高的AMI患者分为3组:≥75岁为高龄组(研究组,63例),65～74岁(老年组,80例)及<65岁(低龄组,104例)患者为对照组,比较高龄组及两个对照组患者接受直接PCI治疗的安全性及住院期间的预后。结果高龄组患者的外周血管严重病变、冠状动脉多支病变及钙化弥漫性病变多于两个对照组,但三组PCI治疗的成功率相当(分别为90.5%、93.8%和95.2%,P>0.05);高龄组患者PCI后24h内肾功能恶化的发生率显著高于对照组;高龄组患者住院期间严重心血管事件(死亡、再梗死)的发生率较高(分别为12.7%、7.5%、2.9%,P=0.02)。大出血发生率差异无统计学意义。结论ST段抬高的高龄AMI患者直接行PCI治疗安全可行;但近期疗效略逊于低龄患者。     

普罗布考与阿托伐他汀联合对急性冠状动脉综合征氧化低密度脂蛋白和炎症因子的影响

目的:评价普罗布考与阿托伐他汀联合对急性冠状动脉(冠脉)综合征患者的血脂、氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)及炎症因子的影响.方法:122例急性冠脉综合征的患者随机分为单药治疗组(n=60,阿托伐他汀10 mg/d)和联合治疗组(n=62,阿托伐他汀10 mg/d+普罗布考500 mg/d).分别于24小时内及治疗后4周、8周检测高敏C-反应蛋白(Hs-CRP)、氧化低密度脂蛋白、纤维蛋白原(FIB)、白介素6(IL-6)以及血脂六项,记录两组患者的不良反应发生情况.结果:治疗8周后联合治疗组的低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白-B、氧化低密度脂蛋白、白介素6、高敏C-反应蛋白较单药治疗组下降更明显,差异有统计学意义(P＜0.01).通过多元相关分析,提示氧化低密度脂蛋白与高敏C-反应蛋白之间具有相关性(r=0.35,P＜0.01).结论:阿托伐他汀与普罗布考联合应用能更显著降低氧化低密度脂蛋白以及低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白-B、高敏C-反应蛋白、白介素6的水平,可能通过降脂、抗炎、抗氧化的作用机制对稳定斑块有一定的作用.     

急性冠脉综合征患者血小板聚集率、CD62p、C-反应蛋白与尿11-脱氢-TXB2水平的变化

目的 观察急性冠脉综合征(ACS)患者入院时和1周时血小板聚集率、血小板CD62p、尿11-脱氢-TXB2与炎性因子高敏C-反应蛋白(Hs-CRP)的水平.方法 选取年龄43～90岁、符合ACS诊断标准如不稳定心绞痛或急性心肌梗死(心梗)的患者95例,人院前每日口服阿司匹林0.1 g,至少服用1周以上.测定患者入院时和1周时的血小板聚集率、CD62p、Hs-CRP、尿11-脱氢-TXB2的水平,同时随访6个月时临床终点事件的发生.结果 AMI组和UAP组患者ADP、AA诱导的血小板聚集率、CD62p、Hs-CRP和尿11-脱氢-血栓素TXB2均显著高于对照组.除了1周时AMI组AA诱导的血小板聚集率与对照组从诱导的血小板聚集率比较差异有显著性,1周时UAP组、AMI组和UAP组各指标与对照组比较均无差异.结论 炎性因子和血小板的活化可能都是影响ACS患者病情发展以及预后的重要因素.尿11-DH-TXB2、Hs-CtiP为影响临床终点事件的因素.     

炎症反应对接受PCI治疗的非ST段抬高ACS患者造影剂肾病的影响

目的:观察接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的非ST段抬高急性冠脉综合征(NST-ACS)患者炎症反应与造影剂肾病(CIN)的关系。方法:239例NST-ACS患者根据是否并发全身炎症反应综合征(SIRS)分为SIRS组(n=68)及非SIRS对照组(n=171)。两组患者均行PCI,观察PCI术前及术后3天两组患者超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL)水平和CIN发生率。结果:术前,SIRS组hs-CRP和IL-6高于对照组(P<0.01),两组患者NGAL无明显差异(P>0.05)。术后3天,两组患者hs-CRP及IL-6均较术前降低,NGAL较术前升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。SIRS组hs-CRP、IL-6及NGAL均高于对照组(P均<0.01)。SIRS组CIN发生率高于对照组(P<0.05)。结论:接受PCI治疗NST-ACS患者体内炎症反应可能是导致CIN发生的因素之一。NGAL可能不是CIN发生的影响因素。