microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究

目的探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染。Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达。结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P<0.05);实时RT-PCR结果显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高。Western blot检测结果显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究

目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

HPV多重感染在宫颈病变中的流行分布及意义

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）多重感染与宫颈病变发生、发展关系。方法应用HPV基因芯片检测技术,对287例宫颈病变患者（CINⅠ130例、CINⅡ69例、CINⅢ48例、宫颈癌40例）的宫颈液基细胞残余标本进行HPV感染基因型检测,并与组织学检测结果比较。结果287例宫颈病变中HPV感染率为89．9％（258／287）,在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌多重感染率分别为48．6％、40．3％、31．1％、27．5％,CINI与CINⅢ及宫颈癌比较,P均〈0．05;HPV最常见亚型为HPV16、HPV58及HPV52;多重感染中以二重感染常见（51／105,48．6％）,偶有五重感染（3／105,2．9％）。40岁以下者HPV多重感染率高于40岁以上者。结论宫颈HPV多重感染率有随宫颈病变程度增加有降低趋势,宫颈病变严重程度可能与HPV基因型多寡无关,而与感染HPV亚型的致病能力密切相关;40岁以下者HPV多重感染发生率高。     

姜黄素对氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响。方法：原代培养孕16～18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5 d,采用随机数字表法,将神经元随机分为5组（n=6）：对照组（C组）、氯胺酮组（K组）和不同浓度姜黄素组（J_1-3组,浓度分别为5,10,20 μmol·L）^-1,K组加入氯胺酮（终浓度为100 μmol·L^-1）孵育3 h,J_1-3组给予氯胺酮前2 h加入姜黄素,使各组姜黄素浓度分别为5,10,20 mol·L^-1,C组加入等量生理盐水。采用MTT法检测发育期神经元活性,流式细胞仪检测线粒体膜电位（Ψ_m）,Western blot法测定p-CREB（ser133）、细胞色素c表达。结果：与C组相比,K组神经元活性降低,神经元线粒体膜电位（Ψ_m）明显降低（P<0.05） p-CREB（ser133）蛋白及BDNF、Bcl-2 mRNA表达下调,细胞色素c表达上调（P<0.05）;与K组相比,J₃组神经元Ψ_m升高,J_1-3组神经元活性增加,p-CREB（ser133）蛋白及BDNF、Bcl-2 mRNA表达上调,细胞色素c表达下调（P<0.05）。结论：姜黄素通过调节p-CREB（ser133）表达,上调BDNF和Bcl-2,稳定Ψ_m,抑制线粒体内细胞色素c释放,进而抑制氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡。     

子宫颈原发性淋巴上皮瘤样癌8例临床病理分析

目的：探讨子宫颈原发性淋巴上皮瘤样癌( lymphoepithelioma-like carcinoma, LELC)的临床病理特征、组织学形态、鉴别诊断及预后。方法收集8例子宫颈原发性LELC的临床病理资料,行HE染色、免疫组化标记及原位杂交检测。结果8例子宫颈原发性LELC患者发病年龄29~67岁,平均年龄44岁,临床分期均为玉B,淋巴结均无转移。眼观：5例子宫颈肿物呈菜花状,1例呈息肉样,其余呈浸润性增厚。镜下见肿瘤由未分化的大细胞组成,散在或成片巢状、条索状分布。瘤细胞呈卵圆形或多角形,细胞核空泡状,核膜清楚,可见1个或数个突出的嗜酸性核仁,细胞界限不清,呈“合体样冶分布。瘤细胞间被丰富的淋巴细胞、浆细胞浸润。免疫表型：CK阳性率100%,p63阳性率37.5%,p16阳性率62.5%,CK5/6阳性率75%,Ki-67增殖指数10%~30%,间质淋巴细胞以CD3和CD8阳性表达为主。原位杂交检测EBER阴性,1例间质淋巴细胞弱阳性。电话随访截止2013年6月,1例死亡,其余7例均存活。结论子宫颈原发性LELC罕见,其是一种具有独特组织学形态的恶性肿瘤,临床预后较好,明确诊断依靠病理组织学和免疫组化标记。     

MDM2-P53反馈调节对大肠癌作用的临床病理学研究

目的分析MDM2基因扩增、P53基因缺失与蛋白异常表达在大肠癌发生演进中的作用、与临床病理因素的关系。方法应用RT-PCR、FISH和免疫组化技术,检测72例大肠癌组织MDM2基因扩增、p53基因缺失以及其蛋白表达特点。结果大肠癌MDM2基因扩增、p53基因缺失率为28.1%和53.1%,两蛋白表达阳性率为43.0%和65.0%。MDM2、p53蛋白在肝转移、淋巴结转移组中表达明显增多,与对照组比较差异有显著性（P=0.011）;p53基因缺失、MDM2基因扩增在有静脉侵袭大肠癌组明显高于无静脉侵袭组（60.7%和31.8%）,MDM2蛋白表达与癌细胞对静脉侵袭性有关（P=0.016）。结论 MDM2、p53基因参与大肠癌发生发展过程,MDM2在肝转移组、静脉侵袭组表达明显增多,可作为肝内微小转移的参考指标,MDM2、p53蛋白表达与淋巴结转移、肝转移有明显相关性,提示预后不良,两基因联合检测对大肠癌预后评估有重要意义。     

肺原发性肝样腺癌临床病理观察

目的探讨肺原发性肝样腺癌的临床病理特征、免疫表型、诊断和鉴别诊断。方法对2014年1月收集的1例肺原发性肝样腺癌的临床表现、大体及组织学形态、免疫组化等进行观察研究,并复习相关文献。结果患者为64岁吸烟男性,因咳嗽、咯血8 d入院。肿物大体呈卵圆形,切面灰白,境界清楚;镜下具有肝细胞癌样和腺癌分化特征,间质可见丰富的血窦。免疫组化示肿瘤细胞Hepatocyte、AFP、CK8/18、CK19、CK(pan)阳性;而CK7、CK14、CK5/6、TTF-1、CEA、Vimentin等阴性。结论肺肝样腺癌是原发于肺的上皮性恶性肿瘤,诊断的确立主要依赖发现相似于肝细胞癌的形态(肝样结构),并通过临床病理与免疫组化检测除外肝细胞癌等疾病的转移。     

罗哌卡因术后镇痛在高龄人工股骨头置换术后早期功能锻炼中的应用

目的:观察罗哌卡因术后镇痛用于老年人工股骨头置换术后早期功能锻炼的效果和安全性。方法:选择期单侧人工股骨头置换术高龄患者120例,行腰硬联合麻醉,术后镇痛随机分为3组:A组为安慰剂组,B组为0.75%布比卡因75 mg+90mL0.9%的氯化钠注射液组,C组为1%罗哌卡因150 mg+85 mL0.9%的氯化钠注射液组,观察并记录术后3组患者不同时点的视觉模拟评分(VAS),开启PCA泵患者按压次数(D),患者的生命体征及不良反应,术后2周内并发症发生率及术后6个月髋关节功能的评价。结果:与安慰剂A组比较,术后B组和C组的VAS明显低于A组(P<0.05),B组与C组无明显差异(P>0.05);术后B组和C组的并发症少于A组(P<0.05),C组术后6个月髋关节功能优良率明显高于A组(P<0.05);与B组比较,C组术后并发症减少。结论:小剂量的罗哌卡因对这类患者镇痛效果好,术后肌力恢复快,术后并发症少,应用于老年全髋关节置换术的早期功能锻炼安全、有效。