RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

氧化苦参碱对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及相关因子的影响

目的 探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及其凋亡相关因子蛋白表达的影响。方法 42只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(NC)、病毒性心肌炎模型组(VM)、OMT高剂量组(OMT-H,25?mg·kg^-1·d^-1)、OMT中剂量组(OMT-M,12.5 mg·kg^-1·d^-1)、OMT低剂量组(OMT-L,6.25 mg·kg^-1·d^-1)、OMT极低剂量组(OMT-EL,3.125 mg·kg^-1·d^-1)、利巴韦林对照组(RB,100 mg·kg^-1·d^-1)。病毒性心肌炎小鼠由柯萨奇病毒B3型腹腔注射感染所致,各治疗组从末次给予病毒24 h后开始,腹腔注射,每日1次。于治疗第12天,每组处死小鼠6只,留取心肌标本。TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,免疫印迹法和免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果 OMT治疗显著降低了病毒性心肌炎小鼠凋亡心肌细胞的数量,与病毒性心肌炎模型组比较,OMT-L组效果最佳(P<0.01)。与病毒性心肌炎模型组小鼠比较,OMT治疗组的小鼠心肌组织中Bax蛋白表达降低,而Bcl-2蛋白表达没有明显改变。结论 氧化苦参碱可减少病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的凋亡,该作用与下调Bax蛋白表达有关。     

重组小鼠β防御素3体内抗甲型流感病毒H1N1作用

目的 观察重组小鼠β防御素3(rMBD3)对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用。方法 以10 mg·kg^-1·d^-1rMBD3腹腔注射3月,观察小鼠的一般状态,以及对主要脏器的影响。BALB/c小鼠,♀,分为正常对照组、模型对照组、rMBD3高剂量组(10 mg·kg^-1·d^-1)、rMBD3低剂量组(5 mg·kg^-1·d^-1)和利巴韦林组(100 mg·kg^-1·d^-1)。采用流感病毒液滴鼻感染建立甲型流感病毒H1N1感染小鼠模型,感染病毒12 h后分别腹腔注射给药。每日观察小鼠一般情况和死亡情况。于攻毒第3天检测肺泡灌洗液流感病毒滴度、血清γ干扰素含量、肺指数和肺组织病理变化。结果 小鼠腹腔注射10?mg·kg^-1·d^-1 rMBD3 3月,未发现明显异常反应或死亡,各重要脏器的未见明显病理改变。rMBD3各剂量组肺泡灌洗液中的病毒滴度、肺指数抑制率均降低,肺组织病理改变减少。结论 rMBD3对小鼠无明显毒性作用,在体内具有抗流感病毒、保护流感小鼠的活性。     

流感病毒感染与宿主细胞的信号传导通路

流行性感冒（简称流感）主要是由甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,IAV）引起的一种急性呼吸道传染病。流感病毒属于正粘病毒科,正粘病毒科病毒有包膜、核酸为分节段的单负链RNA,IAV有8个节段,编码10种蛋白质。血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）是病毒包膜表面的2个重要蛋白质,这2个蛋白质基因突变能产生16种HA和9种NA,可组成不同亚型的IAV。流感病毒的RNA聚合酶复合物是由PBl、PB2、PA以及核蛋白（NP）组成,并与病毒的RNA核糖核蛋白相联接。流感病毒的基质蛋白有2种类型：M1和M2,M1与病毒形态及复制有关,M2形成病毒包膜中的离子通道。     

PRP通过NRF2/HO-1通路对LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症的保护作用

目的 探究富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的BV2细胞炎症反应保护作用与机制。方法 BV2小胶质细胞分成正常对照组、10%PRP对照组、LPS组(LPS诱导)、3%PRP+LPS组(LPS诱导，3%PRP预处理)、5%PRP+LPS组(LPS诱导，5%PRP预处理)和10%PRP+LPS组(LPS诱导，10%PRP预处理),CCK-8测定BV2细胞增殖。共聚焦显微镜测定BV2细胞线粒体膜电位水平，荧光法检测ROS生成情况，Griess法测定NO水平。Western blot检测IL-6、TNF-α、BACH1、GPX4、NRF2和HO-1蛋白表达。此外，用HO-1抑制剂处理BV2小胶质细胞后实验分为正常对照组，LPS组，ZnPP+LPS组，10%PRP+LPS组，ZnPP+LPS+10%PRP,Western blot检测HO-1、IL-6和TNF-α蛋白表达。结果 与正常对照组相比，PRP促进BV2细胞增殖(P<0.01);LPS组线粒体膜电位下降，ROS生成增多，NO、IL-6、T...