小鼠耳蜗核因子-κB p50免疫组化定位

目的 了解核因子-κB(NF-κB)在耳蜗的表达情况.方法 小鼠皮下注射卡那霉素(KA),鼓室注射脂多糖(LPS),以注射等量生理盐水作为对照,用多克隆兔抗体NF-κB p50免疫组化染色,观察NF-κB p50在小鼠耳蜗的表达.结果 NF-κB p50主要定位在耳蜗的螺旋缘、盖膜、血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节和神经纤维.整个耳蜗各圈均可观察到免疫反应,而螺旋韧带、盖膜、螺旋突、螺旋神经节和神经纤维均可观察到较强的免疫反应,Corti器的免疫反应比上述结构要弱一些.Corti器的内、外毛细胞,内、外柱细胞,Deiter细胞和Claudious细胞均可观察到NF-κB p50的免疫反应,这些免疫反应在内沟细胞、Hensen细胞和Claudious细胞较弱,而在螺旋神经节可观察到较强的免疫反应,内、外毛细胞核未见免疫反应.结论 注射脂多糖和卡那霉素可使NF-κB p50在小鼠耳蜗产生急性反应.     

小鼠耳蜗核因子-κB P50的表达

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NFκ-B)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转录因子之一,NF-κB P50是其家族成员。为了显示NF-κB P50在耳蜗的表达,给实验组小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),或鼓室注射脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),对照组小鼠注射等量生理盐水,用NFκ-B P50兔多克隆抗体(PcAb)免疫组化染色(DAB显色),观察NFκ-B P50在小鼠耳蜗的表达。结果显示:在小鼠耳蜗各圈螺旋韧带、盖膜(TM)、螺旋突、螺旋神经节和神经纤维可观察到较强的表达;Corti器的内毛细胞(inner hair cells,IHC)、外毛细胞(outer hair cells,OHC),内柱细胞(inner pillar cell,IP)、外柱细胞(outer pillar cell,OP)、Deiter细胞(DC)、Hensen细胞(HC)和Claudious细胞的细胞质也有NF-κB P50的表达;IHC、OHC和上述细胞的核及基底膜(B)和对照组均未见表达。注射LPS和KA处理的小鼠耳蜗NFκ-B P50的表达,都比对照小鼠明显增强。注射LPS和KA后3d和7d的小鼠,NF-κB P50的表达没有显著性差别。注射LPS和KA可使NFκ-B P50在小鼠耳蜗产生急性免疫反应。     

豚鼠耳蜗外毛细胞的一氧化氮定量分析

目的:为了观察一氧化氮底物左旋精氨酸(L-arginie)和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对豚鼠耳蜗外毛细胞一氧化氮的影响。方法:应用新的荧光染料4,5二氨基乙酰乙酸荧光素(4,5-diaminofluorescein diacetate,DAF-2DA)测定豚鼠耳蜗外毛细胞内一氧化氮的含量。结果:发现加左旋精氨酸后外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值升高。而加左旋硝基精氨酸甲酯后,外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值降低。结论:进一步证明豚鼠耳蜗外毛细胞内存在一氧化氮。