磁分离酶联免疫荧光法(MEIF)检测人血清中胰岛素

目的:采用磁微粒分离酶联免疫荧光(MEIF)分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法.方法:选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mAb).一株mAb用异硫氰酸荧光素(FITC)标记, 另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;偶联羊抗FITC抗体的磁珠用作固相分离载体, 4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物.结果:成功建立了定量检测人血清胰岛素的MEIF, 灵敏度2.0 μIu/mL, 线形范围0～188.52 μIu/mL, 批内变异系数(CV)为4.3%～5.2%, 批间CV为2.6%～9.5%, 稀释回收率为93%～117%, 加标回收率为94%～113%.实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较, 具有良好的相关性.结论:MEIF定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好, 在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景.     

一种高度敏感检测TNF的磁分离酶联免疫法

肿瘤坏死因子 (TNF)是一种单核因子, 主要由激活的单核和巨噬细胞产生, 具有杀伤或抑制肿瘤细胞, 促进T细胞、B细胞的增殖, 参与炎症反应和免疫调节等多种生物学效应。TNF产生异常与多种疾病有关, 如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等 [1], 患者血清TNF的水平均升高, 因此,     

磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用

目的探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果。方法用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体。结果用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应。结论MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法具有广阔应用前景。     

磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立

建立磁分离酶联免疫法定量检测人白细胞介素4(IL-4)的方法.用异硫氰酸荧光素(FITC)和碱性磷酸酶(AP)分别标记识别不同表位的两种抗IL-4单克隆抗体(mAb), 用抗FITC多抗或mAb包被免疫磁珠.结果显示: 检测标准品浓度在0-3ng/mL范围内线性关系良好, 敏感性达10pg/mL, 平均回收率为101.7%,批内批间CV均为3.6%,与ELISA比较相关系数为0.9124.此法所需样本量少, 方法稳定, 敏感性高和特异性强, 又无放射性污染, 在临床检验和基础研究中有较大应用价值.     

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。     

酶联免疫发光法检测金葡菌肠毒素(SE)B和SEC1方法的建立

目的：比较酶联免疫测定法（ELISA）和酶联免疫化学发光法（CLIA）在检测SEB、SECl中的敏感性及稳定性。方法：常规法制备、纯化抗SEB和SEC1单克隆抗体（mAb），以碱性磷酸酶（AP）标记的FMMU-SEB．D6和FMMU-SEC1．C4mAb为检测抗体，FMMU-SEB．B4和FMMU-SEC1．G8mAb为包被抗体，以单磷酸酚酞（PMP）为显色底物，以LumigenAPS-5为发光底物。结果：成功地建立了敏感、特异检测SEB、SEC1的ELISA和CLIA方法，CLIA较传统ELISA具有灵敏度高、线性范围宽和省时等优点。结论：CLIA法是一种比传统ELISA更优越的免疫学检测方法，在可疑SE污染标本检测、流行病学调查等领域具有良好的应用前景。     

应用磁分离酶联免疫技术检测抗日本血吸虫虫卵抗体

目的 建立检测日本血吸虫病患者血清中特异性虫卵抗体的磁微粒分离酶联免疫法（MPAIA）。方法 采用异硫氰酸荧光素（FITC）标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原（Sj-SEA）为检测抗原, 标记羊抗FITC抗体的磁微粒为固相载体, 碱性磷酸酶（ALP）标记羊抗人免疫球蛋白G（IgG）作为酶标二抗, 以单磷酸酚酞溶液为底物, 检测日本血吸虫病患者血清中虫卵特异性抗体。 结果 用磁微粒分离酶联免疫法检测日本血吸虫虫卵抗体, 阳性检出率为96.7%（116/120）, 与旋毛虫、并殖吸虫、嚢尾蚴等其他寄生蠕虫抗体无交叉反应现象, 检测试剂4 ℃可保存12个月。灵敏度参考品的灵敏度为1 ∶ 1 600, 精密度参考品的精密度（CV）＜10%。 结论 磁微粒分离酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、技术先进, 试剂保存时间长等特点。     

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。