洋地黄毒苷通过调控转录因子RORγt的表达抑制Th17细胞产生IL-17A

目的研究洋地黄毒苷(Digitoxin)在体外对人CD4+T细胞产生IL-17A和IFN-γ的影响及其机制。方法人PBMC用抗CD3和抗CD28抗体共刺激或在诱导Th17分化的条件下,同时加或不加Digitoxin,用酶联免疫吸附法检测培养上清中IL-17A和IFN-γ的产生。利用流式细胞术检测细胞因子IL-17A、IFN-γ以及转录因子RORγt的表达。利用Western blotting检测Digitoxin对RORγt表达的影响。结果 Digitoxin对人IL-17A有显著的剂量依赖性抑制作用,并且在刺激的早期(第0小时和第6小时)加入Digitoxin能显著地抑制IL-17A的产生,但不影响IFN-γ的产生,而晚期(第12小时和第24小时)加入Digitoxin对IL-17A的产生没有明显地抑制作用。进一步研究发现,Digitoxin抑制Th17细胞的分化,调控IL-17A的转录因子RORγt的表达。结论本实验表明,Digitoxin通过早期调控RORγt的表达来抑制IL-17A的产生,但不抑制IFN-γ的产生,提示Digitoxin除了对心血管作用外,也可以抑制炎症性疾病和自身免疫性疾病的发生发展。     

人初始和记忆CD4+T细胞信使RNA基因芯片检测结果分析

目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4~+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4~+T细胞,裂解细胞,进行mRNA表达谱芯片检测。结果相比初始T细胞,静息状态下记忆CD4~+T细胞表达高水平的表面分子CTLA-4、PD-1、FAS、CD25,趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3、CXCR5,细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和转录因子T-bet、EOMES、STAT4、GATA3和RORγt,并表达低水平的表面分子CD62L、CCR7、ICAM-I、CD40L,细胞因子IL-1β和转录因子NF-κB。结论静息状态下,与初始CD4~+T细胞相比,记忆CD4~+T细胞高表达某些活化分子、细胞因子、转录因子mRNA,可能是记忆CD4~+T细胞发生快速免疫应答的关键因素。     

组织定居记忆性T细胞的免疫学特征研究进展

正记忆性T细胞通过表达或不表达趋化因子受体CCR7和血管L-选择素CD62(CD62L)来实现在机体外周血和淋巴组织间的循环,分为中央型记忆性T细胞(Central memory T cells,TCM)和效应型记忆性T细胞(Effector memory T cells,TEM)~([1,2])。一般情况下TCM细胞表达CCR7和CD62L,主要分布于外周组织免疫器官和淋巴结,当再次受抗原刺激时可迅速     

IL-12恢复化疗药物对人细胞免疫功能的抑制作用

目的探讨IL-12是否能够恢复化疗药物对人抗原特异性和非特异性细胞的免疫抑制功能及其机制。方法人PBMCs在抗CD3和抗CD28共刺激条件下,加或不加化疗药物和IL-12,不同的方法检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生及其mRNA的表达。利用流式细胞术或Western blotting检测T细胞不同亚群细胞因子IFN-γ和转录因子T-bet、p-STAT-1、p-STAT-4的表达。利用卡介苗(BCG)刺激PPD+PBMCs,检测化疗药物及IL-12对抗原特异性细胞IFN-γ和TNF-α的表达影响。结果化疗药物对人IFN-γ和TNF-α的产生有显著的剂量依赖性抑制作用,同时IL-12对其抑制作用的恢复也呈显著的剂量依赖性;BCG刺激PPD+PBMCs实验证明,化疗药物抑制抗原特异性细胞产生IFN-γ和TNF-α,IL-12能够恢复其免疫抑制功能。进一步研究发现,化疗药物通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达影响IFN-γ和TNF-α的产生,IL-12通过上调STAT-4的磷酸化恢复了免疫的抑制作用。结论化疗药物抑制人的细胞免疫应答,而IL-12通过上调STAT-4的磷酸化完全恢复其抑制作用,从而对肿瘤化疗病人重建免疫功能(包括抗感染和抑制癌细胞的复发)起到非常重要的作用。     

正常人外周血中效应记忆性Th9细胞表型及与其它Th亚群之间的关系

目的探讨正常人外周血中IL-9分泌细胞的表型及Th9细胞与其他Th细胞亚群的关系。方法分离正常人外周血单个核细胞(PBMCs),在不同的刺激条件下,使用ELISA及ELISpot检测IL-9的产生情况,使用流式细胞术(FACS)分析CD3、CD4细胞中IL-9、IL-4、IFN-γ的表达情况。结果正常人外周血PBMCs在不同的刺激条件下均有IL-9的产生,在anti-CD3、anti-CD3+anti-CD28及PMA+Ionomycin的刺激下IL-9的水平分别为(21.73±10.08)pg/ml、(74.14±11.76)pg/ml、(94.76±15.36)pg/ml,各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。外周血中CD3-IL-9+及CD3+IL-9+细胞的频率分别为0.17%±0.05%和0.70%±0.23%。在CD3+IL-9+T细胞中,Th9细胞的比例为0.51%±0.22%。正常人外周血中Th9细胞表型以效应记忆性为主(CD45RO+CD62L+CCR7-),且比例与Th2细胞呈正相关,相关系数R=0.63。结论正常人外周血中存在的IL-9分泌细胞以效应记忆性Th9细胞为主,且其比例与Th2细胞呈正相关。     

人外周血中HMBPP特异性Vδ2T细胞细胞因子的产生和表型特征分析

目的研究人外周血单个核细胞中HMBPP特异性Vδ2 T细胞细胞因子的产生和表型特征。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs)和Vδ2 T细胞,用不同剂量的HMBPP和抗人CD28联合刺激培养不同的时间。用酶联免疫吸附法和酶联免疫斑点法检测IFN-γ、TNF-α和IL-2的产生,利用流式细胞术检测Vδ2 T细胞中IFN-γ、TNF-α和IL-2的百分比及表型特征。结果 HMBPP以剂量依赖和时间依赖的方式刺激PBMCs产生IFN-γ。流式细胞术从单个细胞水平证实PBMCs中有(2.27±0.50)%CD3+T细胞表达Vδ2,HMBPP特异性刺激Vδ2 T细胞表达IFN-γ[(38.84±2.62)%]和TNF-α[(26.65±2.05)%],其中(19.43±2.10)%Vδ2 T细胞共表达IFN-γ和TNF-α。表型分析显示,HMBPP特异性Vδ2 T细胞主要为效应型和中央型记忆细胞的表型特征,即CD45RO+CCR7+/-CD62L-。HMBPP刺激纯化的γδT细胞获得相同的结果。结论 HMBPP特异性诱导人PBMCs中Vδ2 T细胞产生细胞因子IFN-γ和TNF-α,表现为记忆细胞的表型特征,本研究为探究感染和炎症性疾病中Vδ2 T细胞的功能和免疫学特征提供了依据。     

环孢素A对人扁桃体Tfh细胞产生IL-21以及对CD40L和Bcl-6表达的抑制作用

目的探讨环孢素A(CsA)对人扁桃体滤泡辅助性T(Tfh)细胞产生白细胞介素-21(IL-21)以及对CD40L和Bcl-6表达的影响。方法分离正常人外周血及扁桃体单个核细胞,利用PMA+Ionomycin刺激加入不同剂量的CsA,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测IL-21和γ-干扰素(IFN-γ)的产生,利用流式细胞术检测扁桃体Tfh细胞中IL-21、IFN-γ、Bcl-6和CD40L的表达,同时检测Tfh细胞的表型特征。结果 CsA呈剂量依赖性抑制扁桃体Tfh细胞IL-21和IFN-γ的产生,并抑制Bcl-6和CD40L的表达。表型分析显示,CsA主要抑制记忆型Tfh细胞产生IL-21,即CD45RO+CCR7+/-。结论 CsA呈浓度依赖性地抑制人扁桃体Tfh细胞IL-21的产生并降低其Bcl-6和CD40L的表达,主要抑制记忆型Tfh细胞产生IL-21,为探讨环孢素A对Tfh细胞亚群免疫功能的影响提供了依据。     

促红细胞生成素在骨损伤中的临床应用价值

促红细胞生成素(EPO)是一类肽类激素,其主要功能是在机体缺血缺氧的应激条件下刺激骨髓红系造血祖细胞的分化、成熟,最终转变为成熟红细胞。随着对EPO及其受体在其他方面的作用及作用机制的认识越来越深入,EPO的临床应用价值特别是非造血系统中的临床应用价值越来越大。同时随着重组人EPO合成技术的不断提高,EPO已广泛应用于临床治疗并取得了显著的疗效。现就EPO的生化特性、作用机制、非造血生物学作用和临床研究现状进一步论述EPO在骨组织损伤和骨科手术方面的临床应用价值和前景。     

鼻息肉组织和外周血中B细胞亚群和表型功能特征比较分析

目的比较鼻息肉组织和外周血中B细胞的亚群分布、表型及功能特征。方法分离鼻息肉组织浸润的单个核细胞和病人外周血PBMCs,流式细胞术分析其B细胞表面分子的表达;体外培养10 d后,ELISA法检测培养上清中免疫球蛋白(Ig)含量。结果鼻息肉浸润单个核细胞与外周血PBMCs相比,CD19+B细胞的比例无显著变化,但CD19+CD38highCD20+/-浆细胞的比例明显升高(P0.05)。分析B细胞亚群表明,与PBMCs中B细胞相比,鼻息肉浸润B细胞中含有较高比例的记忆性B细胞和生发中心细胞,初始B细胞比例则较低(P0.05)。鼻息肉浸润B细胞大都处于活化状态,CD69的水平明显高于PBMCs中B细胞。与PBMCs中B细胞相比,鼻息肉浸润B细胞表面IgG表达显著升高而IgM表达明显降低(P0.05)。ELISA检测结果表明,未经刺激的鼻息肉浸润单个核细胞产生IgG、IgA和IgM含量与PBMCs相比均显著增加(P0.05)。结论鼻息肉组织和外周血中B细胞亚群分布及功能特征均存在一定差别,本实验为进一步研究B细胞在鼻息肉病理机制中的作用提供了初步的实验依据。