CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4+T细胞相关性的探讨

目的:探讨CD154 细胞的表型特征与初始和记忆CD4 T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3 抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4 T细胞,而不表达于CD8 T细胞。对比分析CD4 CD154 T和CD4 CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4 CD154 T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3 抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4 T细胞均为CD4 CD154 T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4 CD154 T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4 T细胞。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与LSCC发病的相关研究

为研究调节性T细胞在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)、发展中的变化及其参与疾病进展的作用机制,收集2010～2011年上海市五官科医院收治的50例LSCC患者的肿瘤组织和外周血,应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及趋化因子受体CCR6的表达变化,Real-time PCR法检测转录因子Foxp3以及细胞因子mRNA的表达量。结果发现:LSCC患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分比较正常人显著增加,并与临床分期相关;CD4+CD25+CCR6+Treg Foxp3的表达,以及肿瘤组织Foxp3mRNA的表达皆明显高于对照组,且与临床分期、淋巴结转移相关。同时发现,LSCC患者外周血中TGF-β和IL-10mRNA的检出水平分别高于对照组,但IFN-γ、IL-2、IL-12mRNA的水平低于对照组。提示此类Foxp3+Treg属于一类诱导性T抑制细胞(Foxp3+iTreg),可通过产生IL-10和TGF-β抑制LSCC患者的细胞免疫功能。Foxp3的检测可能对判断LSCC的预后有一定价值。     

正常人周围血初始和记忆T细胞亚群及细胞因子表达的探讨

目的：利用多色流式检测技术探讨初始和记忆T细胞亚群与细胞因子表达之间的关系。方法：自正常人静脉血中分离PBMC,经超抗原（SEB）刺激5h后,加入多种抗细胞表面标记和抗细胞因子抗体进行染色,利用流式细胞术检测,并利用Flow Jo软件分析结果。结果：根据CD45RO表达与否,将CD4^＋和CD8^＋T细胞分为初始和记忆T细胞,再根据归巢受体（CD62L）和趋化因子受体（CCR7）的表达与否,将初始和记忆T细胞进一步分为不同的亚群。当T细胞受到SEB激活后,CD45RO^＋和CD45RO^-的CD4^＋或CD8^＋T细胞均表达IL-2、IFN-γ和TNF-α。进一步分析结果表明,CD62L^hi和CD62L^hiCCR7^＋细胞不表达细胞因子,而CD62L^loCCR7^lo和CCR7^＋T细胞均表达细胞因子,其中CD62L^loCCR7^lo细胞表达细胞因子的阳性率明显高于CCR7^＋细胞亚群。结论：只利用CD45RO表达与否区分初始和记忆T细胞是不够准确的,同时检测CD62L的表达,可明显地提高其准确性。     

小鼠脾细胞CD4~+ CD25~+调节性T细胞的表型特征

观察CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞的表型和细胞因子的表达。自小鼠脾脏制备单个细胞悬液,分离CD4+T细胞、CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,进行细胞表面标记,激活后进行细胞内细胞因子染色,利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析细胞表面分子、转录因子和细胞因子表达之间的关系。结果:在CD4+T细胞中,约有7.8%的细胞同时表达CD25分子。与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞CD44的表达略有增加,CD45RB的表达明显下降,CTLA-4和Foxp3明显增加。以同时表达CTLA-4和Foxp3的细胞为主,其次为单独表达Foxp3的细胞。细胞因子的研究结果表明,与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞IL-2、IFN-γ明显减少,而只产生IL-10的细胞略有增加。CD4+CD25+调节性T细胞无论在表型、转录因子的表达以及细胞因子表达方面均于非调节性T细胞不同。     

结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

人外周血CD4~+ IL-21~+记忆T细胞的特征

目的:探讨人外周血中白细胞介素21(IL-21)的产生细胞及其特征。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为不刺激或anti-CD3(OKT3)、OKT3+anti-CD28、PMA+ionomycin刺激四个组,流式细胞术(FCM)检测产生IL-21的细胞亚群。PMA+ionomycin刺激PBMC、纯化CD4+、CD4+CD45RA-、CD4+CD45RA+细胞、脐带血单个核细胞(CB-MC),FCM分析产生IL-21细胞的表型特征和IL-21与Th1、Th2、Th17和Th22细胞因子之间的关系。结果:与OKT3、OKT3+anti-CD28相比,PMA+ionomycin能诱导最高量的IL-21产生。产生IL-21的主要细胞为CD4+T细胞,少数CD8+T细胞。CD4+IL-21+T细胞表达CD45RO,不表达CD45RA,其中部分细胞表达CCR6、CCR7或CXCR5。CD4+CD45RA-细胞表达IL-21远高于CD4+CD45RA+细胞。进一步研究表明,PBMC产生IL-21,而CBMC不产生。此外,大约24%的CD4+IL-21+细胞表达IFN-γ,小于10%CD4+IL-21+细胞表达IL-4、IL-17或IL-22。结论:人PBMC在多克隆刺激的条件下,可以诱导IL-21的产生。产生IL-21的主要细胞亚群具有记忆CD4+T细胞的表型。其中一部分CD4+IL-21+T细胞的表型独立于Th1、Th2、Th17和Th22细胞亚群。     

人肠道正常粘膜组织与外周血中记忆性IL-22~+T淋巴细胞频率及表型的比较

目的比较人肠道正常粘膜组织与外周血中IL-22+T淋巴细胞的频率及其表型特征。方法分离人肠道正常粘膜与外周血中单个核细胞,anti-CD3+anti-CD28刺激后,采用流式细胞术(FACS)检测IL-22的产生及其与IFN-γ、IL-17的关系,分析IL-22+T淋巴细胞CD45RO,CD62L,CCR7,CCR6,CCR10,CCR4等表面分子的表达。结果与anti-CD3+anti-CD28刺激外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞产生少量的IL-22(0.6%;0.57%)相比,肠道粘膜CD4+T细胞产生大约3.15%的IL-22,CD8+T淋巴细胞产生4%左右的IL-22。此外,肠道粘膜CD4+和CD8+T细胞中存在一群产生IL-22并独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17的细胞亚群。肠道粘膜IL-22+T细胞表达较高比例的CD45RO,其中部分细胞表达CCR7,而较少表达CD62L。进一步研究表明,肠道粘膜CD4+IL-22+和CD8+IL-22+T细胞表达较高水平的CCR10(55.3%;73.9%),部分细胞表达CCR6或CCR4。结论人肠道正常粘膜组织中IL-22主要由效应型或中央型记忆T细胞产生,部分IL-22+T细胞独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17细胞亚群。     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

人γδT细胞表型与功能特征的探讨

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生以及初始/记忆细胞标记的表达。结果与αβT细胞相比,γδT细胞高表达CD45RO,低表达CD25和CCR7;与CBMCs中γδT细胞相比,PBMCs中γδT细胞表达CD45RO升高,CD45RA与CD25降低。细胞因子表达的结果表明,与αβT细胞相比,γδT细胞分泌大量IFN-γ和TNF-α,较少分泌IL-2,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA-CD62L-CCR7-;与PBMCs中γδT细胞不同,体外刺激CBMCs中γδT细胞后,表达IFN-γ数量较低,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA+CD62L-CCR7-/+。结论PBMCs与CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能均存在差别,记忆性γδT细胞的增加可能与其活化和免疫应答的作用相关。     

儿童癫痫患者T淋巴细胞活化并产生促炎因子

目的检测儿童癫痫患者外周T淋巴细胞活化状态以及细胞因子水平变化。方法选取20名儿童癫痫患者和19名健康对照儿童,采集外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),用细胞膜表面标记抗体流式细胞术检测T淋巴细胞表面共刺激分子CD69、CD25和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)的表达,用细胞内因子染色结合流式细胞术检测T细胞细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-17A的表达,利用细胞内因子染色结合流式细胞术检测调节性T淋巴细胞(Treg)表达IL-10的情况。结果与对照组相比,儿童癫痫患者外周血中T淋巴细胞表面高表达共刺激分子CD69、CD25和CTLA4,活化的CD4+T细胞高表达IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17 A。在儿童癫痫患者高表达IL-10的Treg数目增加。结论儿童癫痫患者外周T淋巴细胞活化并产生细胞因子。     

人外周血卡介苗(BCG)特异性中央型和效应型记忆CD4+T细胞的特征

目的：探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征。方法：分离PPD^-和PPD^＋正常人PBMCs，与BCG进行培养，采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平，ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及细胞内因子IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果：当BCG刺激后，PPD^＋正常人PBMCs不产生或只产生少量的IFN-γ，而PPD^＋者IFN-γ产生的量和细胞数均明显增加（P〈0．05）。流式细胞检测分析的结果表明，当BCG刺激后，主要是CD4^-而非CD8^＋T细胞表达IFN-γ和IL-2，两者相比具有显著差异。在CD4^＋T细胞中单独产生IFN-γ的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IL-2的细胞占少数。此外，85％～95％以上的CD4^＋IFN-γ^＋T细胞为CD45RO^＋，其中60％以上的细胞为CCR7^＋，其余的为CCR7^-。同样地，80％～95％左右的细胞为CD62L。。结论：BCG可以诱导抗原特异性记忆CD4^＋T细胞的产生，其中大多数为中央型记忆CD4^＋T细胞，少数为效应记忆CD4^＋T细胞，提示其在预防和控制结核分枝杆菌感染中发挥重要作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞/Th17细胞失衡与婴幼儿脓毒症

目的 观察不同免疫状态下婴幼儿脓毒症CD4~+CD25~+Foxp3~(high)岫调节性T细胞(Tr)/Th17细胞的变化,探讨婴幼儿脓毒症适应性免疫紊乱可能的机制.方法 婴幼儿脓毒症48例,健康同龄儿童对照组26例.用流式细胞术榆测CD14~+单核细胞HLA-DR表达率,CD4~+CD25~+Foxp3~(high)Tr 比例及Th17细胞比例;用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及IL-17A等浓度,计算IL-10/TNF-α比值;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4~+T细胞Foxp3、ROR-γt mRNA表达及IL-17A mRNA表达.以CD14~+单核细胞HLA-DR表达＞或＜30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).结果 DR-L组IL-10/TNF-α比值明显高于DR-H组(P＜0.05)及对照组(P＜0.05).CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞比例及转录因子Foxp3基因表达DR-L组明显高于对照组及DR-H组(P＜O.05).Th17细胞比例、IL-17A血浓度、Th17细胞IL-17A基因表达及转录因子ROR-γt基因表达DR-H组及DR-L组均明显高于对照组(P＜0.05),两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).DR-H组和DR-L组Th17细胞主要分化调控因子IL-6、IL-1β血清浓度明显高于正常对照组(P＜0.05),两组问IL-6、IL-1β浓度差异无统计学意义(P＞0.05),DB-L组CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞主要调节因子TGF-β血浓度明显高于DR-H组及对照组(P＜0.05).结论 Th17持续过度活化可能是导致脓毒症前炎症细胞因子/趋化因子持续增高的原因之一;CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Th17细胞失衡可能参与脓毒症混合性拮抗反应综合征(MARS)的发生发展,婴幼儿脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Thl7细胞失衡的原因之一.     

Th22细胞的研究进展

Th22细胞是最近发现的CD4~+T细胞功能亚群,表达CCR6、CCR4和CCR10,产生IL-22和IL-13,但是不产生IFN-γ、IL-4和IL-17,是独立于Th1、Th2和Th17的细胞亚群.IL-6和TNF能够诱导初始CD4~+T细胞向Th22细胞分化.     

1型糖尿病患者外周血IL-35表达及其对Th9细胞的调控作用

目的观察1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, T1DM)患者外周血IL-35的表达及其对Th9细胞的调控作用。方法入组31例T1DM患者和13例对照者, 分离血浆和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。ELISA检测血浆IL-35和IL-9水平, 实时定量PCR法检测PBMCs中IL-35亚基EBI3和IL-12p35亚基以及Th9转录因子PU.1 mRNA相对表达量, 流式细胞术检测PBMCs中Th9细胞比例。使用重组人IL-35刺激T1DM患者和对照者PBMCs, CCK-8法检测细胞增殖, 并检测Th9细胞比例、PU.1 mRNA相对表达量、IL-9分泌水平的变化。分选11例T1DM患者PBMCs中的CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞和CD8+T细胞, 使用重组人IL-35刺激CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞, 将104个CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞与105个CD8+T细胞共培养, ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α水平, 酶联免疫斑点试...     

TWS119 联合细胞因子促进CD8+ 记忆性T 细胞分化及功能

目的:探讨TWS119联合不同组合细胞因子对CD8~+T细胞分化、表面分子表达、细胞因子分泌及抗凋亡能力的影响。方法:采用密度梯度离心法获取健康供者外周血中单个核细胞,磁珠分选CD8~+T细胞。体外采用IL-7、IL-15、IL-21及TWS119等不同组合方式培养。采用流式细胞术检测CD8~+T细胞亚群比例、表面分子表达水平、细胞内因子分泌及细胞凋亡情况。结果:与其他组合相比较,IL-7+IL-21+TWS119联合处理CD8+T细胞后,干细胞样T细胞亚群比例显著增加;同时,CD8~+T细胞表面激活型标志物CD28和CD27表达水平增加,抑制型分子PD-1和Tim-3表达水平下调(P0. 05);同时,采用IL-7+IL-21+TWS119处理显著增加CD8~+T细胞中胞内因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平(P0. 05)以及显著降低凋亡细胞的比例(P0. 05)。结论:TWS119联合细胞因子IL-7和IL-21促进CD8+T细胞向记忆亚群分化,同时增强其抗肿瘤效应。     

异基因骨密质来源间充质干细胞对小鼠急性GVHD 的防治作用及其机制研究

目的:明确异基因骨密质来源的间充质干细胞(CB-MSCs)是否能有效防治急性GVHD,并进一步探讨其可能的治疗机制。方法:采用骨密质碎片法从C57BL/6(H-2b)小鼠分离和扩增MSCs。通过构建小鼠allo鄄HSCT 后GVHD 模型:雌性供鼠C57BL/6 (H-2b)寅雄性受鼠BALB/ c (H-2d),然后观察CB-MSCs 移植对GVHD 的影响。本实验小鼠共分为4 组:淤单纯照射组;于GVHD 组; GVHD+MSCs 组;榆正常对照组。在GVHD 诱导后不同时间点观察各组小鼠生存率、体重变化和临床GVHD 积分;应用ELISA 方法检测各组小鼠外周血细胞因子(TNF-β、IFN-β和IL-4) 和趋化因子(CCL5、CXCL9 和CXCL10)浓度;应用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T 细胞(Treg 细胞)百分比和CD3+ T 细胞表面趋化因子受体CXCR3、CCR5 和CCR7 的表达。此外,我们还应用实时定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)方法检测了各组小鼠骨髓中T-bet 和GATA-3 的mRNA 表达水平。结果:CB-MSCs 能显著提高GVHD 小鼠生存率、减少其体重缺失,并显著降低临床GVHD 积分;CB-MSCs 对GVHD 的防治作用可能与降低外周血TNF-β、IFN-β、CCL5、CXCL9 和CXCL10 浓度,增加Treg 细胞百分比,下调T 细胞表面CXCR3、CCR5 的表达和上调CCR7 的表达有关。此外,诱导骨髓Th1/ Th2 平衡向抗炎的Th2 极倾斜可能也是CB-MSCs 对GVHD 发挥治疗作用的机制之一。结论:异基因CB-MSCs 显著增加了GVHD 小鼠生存率。其治疗机制可能与CB-MSCs 能够减少炎性细胞因子和趋化因子的释放,诱导Treg 的生成,调控T 细胞表面趋化因子受体的表达,以及纠正Th1/ Th2 的失衡有关。     

外周血CD4+CXCR5+滤泡辅助性T细胞与慢性乙型肝炎患者高球蛋白血症相关

目的 检测外周血CD4+ CXCR5+滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)的频率及其表面标志,分析与慢性乙型肝炎(乙肝)患者高球蛋白血症的关系.方法 收集健康人、乙肝患者及乙肝高球蛋白血症患者的外周血,分离血浆及外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测血浆中IL-21、CXCL13和IFN-γ水平,流式细胞术检测PBMC中CD4+ CXCR5+ Tfh细胞的频率及其表面PD-1、ICOS及CD40L的表达情况.结果 乙肝高球蛋白血症患者外周血CD4+ CXCR5+ Tfh细胞占CD4+T细胞的百分比(22.6±4.7)％明显高于普通慢性乙肝患者(11.9±3.9)％及健康志愿者(6.8±3.9)％,CD4+ CXCR5+ Tfh细胞上PD-1和CD40L的表达水平升高,血清IL-21及CXCL13水平升高,而IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血CD4+ CX-CR5+ Tfh细胞与乙肝高球蛋白血症的发病相关.     

趋化因子受体CCR5、CCR7、CXCR3和CXCR6在丙肝患者肝内及外周血CD4+ T淋巴细胞上的表达及其意义

目的比较趋化因子受体CCR5、CCR7、CXCR3和CXCR6在丙肝患者肝内和外周血CD4^＋T淋巴细胞表面表达水平及其意义,同时进一步了解其与肝脏组织学炎症反应的关系.方法采用荧光标记抗趋化因子受体的单克隆抗体对肝内及外周血中CD4^＋T淋巴细胞表面的趋化因子受体进行染色后,采用9色11参数流式细胞仪LSRⅡ进行检测分析.结果（1）肝内CCR5^＋、CXCR3^＋或/和CXCR6^＋的CD4^＋T淋巴细胞频数高于外周血（P＜0.001）,而CCR7^＋CD4^＋T淋巴细胞频数低于外周血（P＜0.001）;（2）肝内CCR5^＋或CXCR6^＋的活性（CD38^＋）CD4^＋T淋巴细胞频数高于外周血（P＜0.05）;（3）肝内表达2种或2种以上趋化因子受体CCR5、CXCR3和CXCR6的CD4^＋T淋巴细胞频数明显高于外周血（P＜0.001）,而不表达或仅表达一种上述趋化因子受体CD4^＋T淋巴细胞频数明显低于外周血（P＜0.001）;（3）CCR5和CXCR6在肝内CD4^＋T淋巴细胞表面的表达有中等度相关;（4）肝内组织学炎症明显组表达趋化因子受体CCR5、CXCR3或CXCR6的CD4^＋T淋巴细胞频数高于炎症轻微组.结论趋化因子受体CCR5、CXCR3和CXCR6可能介导CD4^＋T淋巴细胞向肝内迁徙定植,并参与肝脏炎症的病理免疫学反应过程.     

过敏性哮喘患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞的变化及其细胞因子表达研究

本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞数量、表型变化及其细胞因子的分布特征。选取25例过敏性哮喘患者、25例非过敏性哮喘患者及27例性别和年龄相匹配的健康对照作为研究对象,流式细胞术检测外周血中CXCR5~+CD4~+T细胞数量及表型,胞内细胞因子染色方法检测细胞因子分布情况。结果显示过敏性哮喘和非过敏性哮喘组外周血CXCR5~+CD4~+T细胞比例均高于健康组[(19.24±5.39)vs(8.24±1.68),P0.01;(17.79±4.01)vs(8.24±1.68),P0.01],而患病两组间无明显差异(P0.05)。患病两组患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞表面PD-1[(15.82±2.71)vs(7.64±1.87),P0.01;(14.28±3.68)vs(7.64±1.87),P0.01]、ICOS[(9.82±2.27)vs(4.98±1.76),P0.01;(10.53±2.08)vs(4.98±1.76),P0.01]表达均高于健康组,而患病两组间差异无统计学意义(P0.05)。患病两组CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-21的表达均显著高于正常对照组(P0.01)。而CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-4仅在过敏性哮喘患者中高表达(P0.01)。CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-17、IFN-γ的表达在三组之间无差异(P0.05)。过敏性哮喘组患者IL-4+CXCR5~+CD4~+T细胞、IL-21+CXCR5~+CD4~+T细胞比例与血清总IgE水平呈正相关(r=0.652,P=0.003;r=0.523,P=0.021)。研究结果表明过敏性哮喘和非过敏性哮喘两种表型哮喘在外周血CXCR5~+CD4~+T细胞数量、表型上未见差异,一群高表达IL-4的CXCR5~+CD4~+T细胞可能在过敏性哮喘疾病机制中具有重要意义。