二氯化钴致人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位

目的 观察和探讨低氧可否引起人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位.方法 用人结肠癌细胞系HCT-116的cDNA序列,用分子克隆法构建过表达CacyBP/SIP的绿荧光慢病毒载体,转染至结肠癌SW480细胞,用CoCl2作为刺激因子,激光共聚焦显微镜和Western blot检测CacyBP/SIP的表达及定位.结果 构建了过表达CacyBP/SIP的慢病毒载体,转染至结肠癌细胞,CoCl2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,刺激后CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核.结论 CoCl2刺激后可致CacyBP/SIP核转位.     

SOX10对胶质瘤细胞增殖及去分化的影响

目的探讨SOX10过表达对胶质瘤细胞增殖和去分化的影响。方法胶质瘤细胞株U87转染SOX10腺病毒48 h后收集细胞进行MTT、流式细胞术、Western blot和Q-RT-PCR。结果 U87细胞感染SOX10过表达腺病毒后细胞的增殖受抑制,DNA合成减少,S期细胞数减少,干细胞标志CD133上调。结论 SOX10可能在胶质瘤细胞的去分化中起重要作用。     

人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定

目的 构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定.方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向克隆到亚细胞定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/nuc(胞核定位载体)、pCMV/myc/cyto(胞质定位载体).转化E.coli DH5α感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆.重组质粒经PCR及双酶切鉴定并进行序列测定.结果 从HCT-116的cDNA模板扩增684 bp的hCacyBP基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/nuc-hCacyBP、pCMV/myc/cyto-hCacyBP,PCR及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合,测序分析进一步表明所克隆的基因为编码hCacyBP的基因片段.结论 成功构建hCacyBP基因亚细胞定位载体,这将为研究结肠癌胞核、胞质内的hCacyBP功能和研究该基因异常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础.     

大肠癌组织库建立及质量控制的经验

目的建立规范的大肠癌组织库,收集高质量的标本应用于肿瘤研究。方法 筹备建立组织库所需资金并通过伦理委员会同意,建立标本收集、储存的标准操作流程;收集临床患者的术后病灶标本并冷冻储存;对组织库及标本进行严格的质量控制。结果 本研究建立了标准的组织库操作流程;建库1年收集大肠癌患者组织标本587个、血浆标本549个;随机选取样本的质量检测显示样本DNA、RNA为高质量,癌组织中肿瘤细胞比例>80.0%;标本临床资料完整。结论 质量控制显示收集的冰冻大肠癌组织其分子质量可靠,并有完整的病例临床资料,可充分满足研究的需要。