El Tor型霍乱弧菌口服活疫苗候选株IEM108的构建

目的 构建能够诱导抗菌抗毒素免疫和抵抗CTXΦ转染的霍乱弧菌生物安全性口服活疫苗候选株。方法 以不产毒的EI Tor型霍乱弧菌疫苗候选株IEMl01为出发菌株，以管家基因thyA为选择压力，在IEMl01的thyA基因缺失株IEMl01-T中，通过质粒．染色体致死平衡系统表达霍乱毒素B亚单位基因ctxB和介导CTXΦ噬菌体免疫的rstR基因。在家兔模型中，通过检测血清杀弧菌抗体和抗CTB的IgG抗体来评价该新建疫苗候选株的免疫原性；以对家兔攻毒试验后肠段积液量来评价其保护力。结果 含ctxB、rstR和大肠杆菌来源的thyA基因的重组质粒在：IEMl01-T中稳定存在，GMI-ELISA检测ctxB基因能够很好表达。动物试验表明，该新建疫苗候选株能刺激机体产生高滴度的血清杀弧菌抗体和抗CTB IgG抗体，能较好抵抗至少4μg纯品CT和不同毒株的攻击。结论 应用质粒．染色体致死平衡系统构建了能抵抗CTXΦ转染和稳定表达ctxB的生物安全性抗菌抗毒口服活疫苗候选株，其在家兔模型中有较好的免疫原性和保护力。     

新疆出血热病毒S基因在真核系统的克隆和表达

目的　在真核系统表达XHFVS基因片段 ,制备安全、特异、便于操作的S蛋白。方法设计引物 ,扩增得到S基因编码片段 ,用杆状病毒表达载体pFastBacHTb克隆S基因 ,并在昆虫细胞中表达S基因。结果　地高辛探针杂交和PCR扩增结果表明成功地构建了含XHFVS基因片段的pBac Sxhf质粒。SDS PAGE分析表达产物在相对分子质量 (Mr)为 6 6× 10 3 下方出现 1条明显的蛋白条带 ,Westernblot发现该蛋白带可以与抗XHF病毒核蛋白单克隆抗体发生反应。结论　构建的含XHFVS基因的重组杆状病毒可以在昆虫细胞表达S蛋白 ,该蛋白可与特异性抗体相结合