鲈鱼口服生物胶囊疫苗的研究

以暴发弧菌病的鲈鱼 (Lateolabraxjaponicus)鱼苗体内分离的 1株病原菌W 1(Vibrioanguillarum)为材料 ,分别以直接浸浴法、创伤后浸浴法和肌肉注射法人工感染鲈鱼鱼苗。结果表明 ,这三种感染方式均能使鲈鱼发病 ,其半致死浓度 (LD50 )分别为2 75× 10 7cfu/ml ,4 .68× 10 6cfu/ml和 3.72× 10 5cfu/尾。在此基础上 ,分别以福尔马林灭活法和喷雾干燥法制备了全细胞疫苗和微胶囊疫苗。将全细胞疫苗及微胶囊疫苗以直接拌入饵料法和卤虫携带法等两种方法口服免疫接种鲈鱼鱼苗 ,一周后以W 1活菌攻毒( 2 50× 10 6cfu/尾 )。结果表明 ,各免疫组一周的累积死亡率远低于两组对照组 ( 95% )。其中 ,以卤虫携带的生物微胶囊疫苗组的一周累积死亡率最低 ,为 2 5.0 % ;以卤虫携带的生物全细胞疫苗组的一周累积死亡率较高 ,为 60 .0 %。因而 ,以卤虫携带的生物胶囊疫苗组的免疫保护力最高 ,为 73.7% ,其次为微胶囊疫苗直接投喂组 ,保护力为 56.8%。直接投喂和卤虫携带法的全细胞疫苗也显示了一定的免疫效果 ,其免疫保护力分别为 52 .6%和 36.8%。     

应用间接ELISA技术快速检测花鲈病原菌-鳗弧菌

以花鲈（Lateolabrax japonicus)弧菌病的病原菌－鳗弧菌（Vibrio auguillarum)W-1为抗原,制备兔抗血清;利用辣根过氧化酶标记的羊抗兔血清（HRP－IgG)为酶标二抗,建立了检测鳗弧菌的间接ELISA快速检测法。结果表明,应用间接ELISA技术检测鳗弧菌有较高的灵敏度,最低的检测量为10^5个／ml,即10^4个／孔。同时交叉反应表明其具有较高的特异性。对46份人工感染后的花鲈组织样品,包括肌肉、鳃、肠、肝、肾等组织的检测表明,阳性检测率为76．1％。     

致病性鳗弧菌金属蛋白酶基因克隆及序列分析

从我国山东沿海发病的鲈鱼（Lateolabrax japonicus）分离到一株致病性鳗弧菌（Vibrio anguillarum）W-1，该菌的胞外蛋白酶活性为4226u/ml，部分纯化的胞外蛋白酶对海水养殖大菱鲆鱼有一定的毒性。应用PCR扩增，从鳗弧菌W-1染色体DNA扩增出一条长约1.925kb的特异性PCR产物，DNA序列分析表明：克隆的片段含有完整的金属蛋白酶基因阅读框，编码611个氨基酸残基的蛋白质，该金属蛋白酶基因与一株致病性鳗弧菌蛋白酶基因的核苷酸及氨基酸序列同源性为100%，而与解蛋白弧菌（V.proteolyticus)、创作弧菌（V.vulnificus）、霍乱弧菌（V.cholerae)、斑点气单胞菌（Aeromonas punctata），嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的氨基酸序列同源性分别为73%、70%、69%、53%、51%。     

鳗弧菌灭活疫苗对海水养殖大菱鲆的免疫预防研究

福尔马林灭活的鳗弧菌疫苗分别以浸泡、注射接种的方式对海水养殖大菱鲆鱼苗进行免疫 ,定期检测血清中特异性抗体。 4周后用鳗弧菌悬液 (3.7× 1 0 8cfu/ml) 0 .2ml腹腔注射感染免疫鱼。结果表明 ,灭活鳗弧菌疫苗用 2种方式免疫后都能刺激大菱鲜产生特异性免疫反应。其中注射免疫组在 1周后即可产生特异抗体 ,在 6周内一直呈上升趋势 ,最高达 1 2 2 8.8,免疫 4周后人工感染后的免疫保护力为 91 .70 %。浸泡免疫组在 3周后才产生抗体凝集价 ,凝集抗体效价最高 36 ,免疫保护力为 33.30 %。     

有益细菌A18在海湾扇贝(Argopecten irradians)育苗中的应用

在海湾扇贝D形幼虫期施用10^3,10^4,10^5CFU／ml三个浓度的有益细菌A18。经该菌处理后，扇贝幼苗的变态率与各个发育期的成活率均比加氯霉素组和未加任何处理的对照组高。其中以10^4CFU/ml处理的扇贝幼苗的变态率和成活率最高。对实验扇贝幼菌水体细菌总数和弧菌数分析发现，经10^5,10^4CFU/ml A18菌处理水体的细菌总数和弧菌数均比相应的对照组低。在扇贝育苗水体加入10^6,10^7,10^8CFU／ml的有益细菌A18，检测高浓度A18对扇贝幼苗的毒害作用，当该菌浓度在10^6CFU/ml时，经48小时扇贝幼苗成活率79％，高于对照组的68.5%；当浓度达10^7,10^8CFU/ml时，处理48小时后的扇贝幼苗死亡率分别为95.6%和100％。     

海洋有益菌的筛选与鉴定

从健康的斑节对虾（Penaeus monodon）幼体及其养殖环境中分离到213株海洋细菌,采用十字叉划线法和琼脂扩散法进行体外拮抗试验,从中筛选到5株对水产养殖动物病原哈维氏弧菌（Vibro harueyi）和鳗弧菌（Vibrio anguillarum）等菌株生长有抑制作用的海洋细菌。根据其形态特征以及生理生化反应特征,初步鉴定为交替单胞菌属（Alteromonas）,其中菌株A18鉴定为橙色交替单胞菌（Alteromonas aurantia）。