CGP37157对静息期心肌细胞钙循环的影响

目的：研究离子通道阻断剂CGP37157对成年大鼠静息期心肌细胞钙循环的影响。方法：（1）32只雄性SD大鼠随机等分为4组,用于测定心肌组织中cAMP的含量。对照组不灌流CGP37157,实验组分3个时间梯度：用10μmol/L CGP37157灌流心脏15 min、30 min和60 min;（2）20只雄性SD大鼠随机均分为两组,对照组和实验组（细胞池中加入10μmol/L CGP37157）采用常规酶解法分离心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜记录钙瞬变;利用SPSS11.5统计软件进行数据处理,所有数据以均数±标准差（x珋±SD）表示,两组间均数的比较采用t检验。P〈0.05为差异有统计学意义。结果：（1）心肌组织中cAMP含量的比较：CGP37157引起心肌组织cAMP的含量显著增加（n=8,P〈0.05）,对照组、15 min、30 min和60 min各组测得的cAMP的含量分别为（791±35）pmol/g、（1 101±55）pmol/g、（1 525±40）pmol/g、（2 017±60）pmol/g;60 min组较30 min组cAMP含量显著增加（n=8,P〈0.05）;（2）对静息期肌浆网钙循环的影响：实验组钙存储改变量（20.2±0.8）显著高于对照组（0.3±0.3;n=10,P〈0.01）;实验组钙释放速率变化（5.02±0.015）比对照组显著增大（1.01±0.006;n=10,P〈0.01）;实验组钙回摄速率变化（1.08±0.15）与对照组没有差异（0.99±0.09;n=10,P〉0.05）。结论：CGP37157导致静息期心肌细胞钙循环的异常,原因可能为其导致PKA通路异常。     

PKA信号通路与ryanodine受体介导的心肌肌浆网钙泄漏关系的研究

目的：研究β肾上腺素激活的PKA信号通路与成年大鼠心肌细胞RyR2介导的肌浆网Ca^2＋泄漏之间的关系,探讨治疗心力衰竭的新方法。方法：NiCl2（5mmol/L）和毒胡萝卜素（TG,100nmol/L）分别阻断成年大鼠心室肌细胞的钠钙交换体和钙泵,胞外灌流异丙肾上腺素（ISO,1μmol/L）。采用激光扫描共聚焦显微镜记录灌流前后细胞内钙火花及[Ca2＋]i的变化,并使用Ca^2＋通道阻断剂钌红（RR,5μmol/L）对β肾上腺素刺激作用进行逆转,进而阻断RyR2介导的肌浆网内钙泄漏。结果：ISO胞外灌流后,心肌细胞钙火花发生率和[Ca^2＋]i与对照组相比明显升高（n=10,P〈0.05）;加入RR后,心肌细胞内钙火花发生率与对照组比较显著降低（n=20,P〈0.05）,[Ca^2＋]i两组没有明显差别（n=20,P〉0.05）。结论：ISO激活PKA信号通路后可诱导心肌细胞RyR2介导的钙泄漏,RR可有效地逆转这种钙泄漏。     

槐定碱对心力衰竭大鼠心肌细胞钙诱导钙释放的影响

目的:研究槐定碱对心力衰竭大鼠心肌细胞钙诱导钙释放的影响。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心力衰竭模型,随机分为假手术组、心力衰竭组、槐定碱5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg剂量组。4周后酶解法分离各组大鼠心室肌细胞,采用膜片钳和激光扫描共聚焦显微镜同步实时记录系统记录心肌细胞的L-型钙电流(ICa.L)及胞浆内的钙瞬变。结果:心力衰竭组大鼠心肌细胞的ICa.L、钙火花发生率及钙瞬变峰值明显低于假手术组;槐定碱中剂量和高剂量组大鼠心肌细胞的ICa.L、钙火花发生率及钙瞬变峰值明显高于心力衰竭组;槐定碱低剂量组与心力衰竭组相比差异不显著。结论:一定浓度的槐定碱对改善心力衰竭大鼠心肌细胞钙诱导钙释放功能具有重要的作用。     

心衰心肌细胞肌浆网钙泵对兴奋收缩偶联功能的影响

目的：研究钙泵介导的钙回摄对成年大鼠心室肌细胞兴奋收缩偶联功能的影响。方法：急性分离正常组和心衰组大鼠心室肌细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜研究肌浆网的钙容量,然后利用异丙肾上腺素（ISO,1μmol/L）激活心肌细胞β-肾上腺素受体后采用激光扫描共焦显微镜记录其对心肌细胞介导的钙释放;采用Western-blot分析心肌细胞肌浆网钙泵表达水平。结果：心衰组的钙容量显著低于对照组（n=10,P〈0.01）;ISO胞外灌流后,心衰组心肌细胞钙释放水平显著降低（n=10,P〈0.05）;心衰组钙泵表达水平低于对照组（n=6,P〈0.01）。结论：钙泵介导的钙回摄能影响心肌细胞肌浆网钙容量,并进一步影响心肌细胞兴奋收缩偶联的功能。