食品沙门氏菌环介导等温扩增技术应用研究进展

沙门氏菌引起的人畜共患疾病每年引发大量财产损失,快速简易的检验方法对于食品沙门氏菌的检验至关重要。环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）作为PCR的有力替代工具,经历多年发展已在等温扩增领域显示出明显优势,在沙门氏菌检测应用方面也日渐成熟。本文对近五年来LAMP技术在沙门氏菌检测中的应用和LAMP技术检测平台进行了分析汇总。在沙门氏菌LAMP技术的特异性方面,对现有靶标基因的有效性和新靶标基因的有效性进行了探讨,对不同血清型的特异性检测和多重LAMP的应用进行了总结,分析其优点与不足之处,以此说明探针法、多重检测,微流控技术和即时检测（Point-of-Care Testing, POCT）是沙门氏菌LAMP技术的未来发展方向,为LAMP技术更好地应用于沙门氏菌检测提供参考依据,对于提高食品中沙门氏菌的检验能力具有重要意义。     

mini-MPN-STE-qPCR法快速定量检测食品中沙门氏菌

目的 建立一种快速、简易、可定量检测食源性沙门氏菌定量PCR(quantitative PCR, qPCR)方法。方法 依据沙门菌属invA基因序列设计染料法qPCR引物, 建立基于嵌合荧光法的沙门氏菌qPCR检测方法, 并通过短时间增菌(short time enrichment, STE)的5管微型多管发酵计数法（mini-most probable number, mini-MPN）进行定量检测, 构建mini-MPN-STE-qPCR法。使用人工污染的鸡肉混合液进行定量检测, 检测结果与传统MPN计数法和平板计数法进行比较分析。结果 建立的 qPCR法特异性良好, 方法灵敏度为50 CFU/mL, 结合48孔板min-MPN和4h 短时间增菌建立的mini-MPN-STE-qPCR法可将整个检测流程缩短至7 h。人工添加沙门氏菌的鸡肉混合液检测结果表明方法检出限为-0.347 log MPN/mL, Bland-Altman分析结果显示, 此法与传统MPN计数法相关系数R2=0.994, 与平板计数法相关系数R2=0.992。结论 该方法准确、简单易行、成本低、灵敏度高, 可用于食品中沙门菌的快速定量检测。     

基于ttr基因的mini-MPN-qLAMP法快速定量检测食品中沙门氏菌

该研究通过3管型微量MPN计数法（Mini Most Probable Number,mini-MPN）建立了一种快速定量检测食源性沙门氏菌的荧光定量环介导等温扩增（Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification,qLAMP）方法。依据沙门菌属ttr基因设计了qLAMP和荧光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR）引物,结合5 h BPW增菌和MPN计数法建立了mini-MPN-qLAMP沙门氏菌快速定量检测方法;使用两种人工污染样品对mini-MPN-qLAMP法进行验证,使用Bland-Altman分析比较不同检测方法检测结果的一致性。结果表明,建立的qLAMP法与qPCR法反应特异性均良好,纯培养时qLAMP法检出限为500 CFU/mL。通过Bland-Altman分析表明所建立的mini-MPN-qLAMP法在速冻乌米饭中检测结果与mini-MPN-qPCR、mini-MPN计数法、平板计数法相比均具有较高的一致性,r2≥0.994,检出限为-0.44 lg MPN/mL;而在速冻鸡胸肉中该法检测结果与mini-MPN-qPCR结果一致性最佳,r2=0.990,检出限为-0.64 lg MPN/mL。肉制品中腐败杂菌会影响mini-MPN计数和平板计数结果,mini-MPN-qLAMP可排除肉制品中腐败杂菌对检测结果的影响。该研究所建立的mini-MPN-qLAMP法简单易行,准确度高,可用于食品中沙门氏菌的快速定量检测。