菜籽蛋白质组双向电泳技术体系的优化研究

[目的]建立适用于莱籽蛋白质组研究的双向电泳技术.[方法]以湘油17号为材料,对双向电泳技术中的样品制备方法、凝胶浓度、上样量等条件进行了优化.[结果]使用TCA-丙酮法提取莱籽总蛋白最佳,所获蛋白在2-DE图谱上获得的点数最多.当采用pH3～10IPG胶条和12%的凝胶、上样量为250μg时,可得到背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱.[结论]为开展油菜种子蛋白质组学研究奠定了基础.     

米根霉葡萄糖淀粉酶的分离纯化及特性研究

葡萄糖淀粉酶是米根霉在淀粉质培养基中诱导分泌的一类胞外酶，其表达对米根霉转化淀粉生成L-乳酸的效率，以及L-乳酸分批发酵周期的长短有很大影响。本文对米根霉葡萄糖淀粉酶进行分离纯化，并研究其酶学性质，结论如下：经硫酸铵盐析、透析脱盐、Sephadex G-100柱层析等纯化步骤，葡萄糖淀粉酶比活力提高23倍。SDS-PAGE显示纯化后的酶为一条带，相对分子量约75．5kD。该酶以可溶性淀粉为底物时最适催化反应pH值为4．0～6．0，最适催化反应温度为40-50℃，在50℃下保持稳定。钙离了和锰离子对该酶活力有一定的增强作用，而铅离子和亚铁离子对其活力有明显的抑制作用。     

高压复合pH偏移预处理对大豆蛋白糖基化复合物结构及乳化性质影响

本研究运用超高压处理、碱性pH偏移处理对大豆分离蛋白（soy protein isolate, SPI）进行单独和复合处理后,将其与麦芽糊精进行糖基化反应,并测定不同预处理条件对复合物结构及乳化性质影响。结果表明,与单一超高压处理或pH偏移处理相比,高压协同碱性pH偏移处理对糖基化反应的促进效果更明显。复合处理使糖基化复合物的接枝度与褐变程度增大,二级结构由有序向无序的转变程度增大,蛋白质内部疏水基团暴露量增多,蛋白分子三级结构趋于松散。其中400 MPa高压处理协同碱性pH偏移处理对糖基化改性的促进效果最为显著,所得糖基化样品的乳化活性（31.38 m2/g）和乳化稳定性值（36.88 min）最大,分别为对照组的1.89倍和1.60倍。     

豆腐柴果冻的制作工艺优化及其降血糖活性研究

目的研究豆腐柴果冻的最优制作工艺及其降血糖活性。方法以豆腐柴鲜叶超微粉为原料,以热处理的碳酸钙为凝固剂,通过单因素和响应面法优化豆腐柴果冻的制作工艺,并对豆腐柴果冻的感官、质构、营养成分及降血糖活性进行了分析。结果豆腐柴果冻的适宜制作条件为料液比1:17(g:m L),CaCO_3添加量0.06%,水浴温度85℃;每克豆腐柴果冻含有(23.65±1.21)mg黄酮和(155.71±10.86)mg果胶,具有抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的作用。豆腐柴果冻的降血糖活性可能与其还有丰富的黄酮和果胶有关。结论豆腐柴果冻不仅营养丰富,而且具有降血糖效应,可以作为糖尿病患者的辅助休闲食品或代餐食品。     

超声波和糖基化复合改性对小麦面筋蛋白性质和结构的影响

采用超声波处理小麦面筋蛋白并经葡萄糖糖基化改性后,研究其溶解性和乳化性的变化,同时对改性小麦面筋蛋白的结构进行表征。结果表明,适当的超声波处理有利于小麦面筋蛋白的糖基化改性,40 k Hz、300 W超声波处理40 min的小麦面筋蛋白糖基化改性效果最为显著,其在等电点处的溶解性较对照组提高了82.15%,且乳化活性及乳化稳定性最高,分别达到56.82 m~2/g和36.27 min。适当的超声波处理使小麦面筋蛋白表面疏水性提高,而与葡萄糖接枝后,蛋白的表面疏水性降低。傅里叶变换红外光谱表明,小麦面筋蛋白以共价键的结合形式接入了葡萄糖分子,生成了糖蛋白。     

微波预处理对热诱导小麦面筋蛋白凝胶性质和微观结构的影响

研究微波预处理对热诱导小麦面筋蛋白凝胶性质和微观结构的影响。结果表明,当微波条件为700 W功率,处理时间90 s时,热诱导小麦面筋蛋白凝胶强度和持水性达到最大值158.6 g/cm~2和83.13%,比对照组分别提高83.4%和162%,此时凝胶中非冻结水的比例也显著提高。随着微波功率从70 W增加到700W,微波处理时间从10 s增加到90 s,热诱导小麦面筋蛋白凝胶的表面疏水性逐渐降低。微波预处理还显著增大了热诱导小麦面筋蛋白凝胶体系中的疏水相互作用,疏水相互作用的贡献从0.85 g/L增大到1.69 g/L。微波预处理的热诱导小麦面筋蛋白凝胶具有更为致密、均匀的微观三维网络结构。     

脱酰胺对热诱导小麦面筋蛋白构象及凝胶性质的影响

利用蛋白质谷氨酰胺酶(PGase)对小麦面筋蛋白进行处理,研究PGase脱酰胺及热诱导对小麦面筋蛋白构象及其凝胶性质的影响。结果表明,PGase脱酰胺能够在一定程度上抑制小麦面筋蛋白的热诱导聚集行为,提高小麦面筋蛋白热诱导凝胶的强度和保水性。当PGase添加量为3 U/g时,其凝胶强度和保水性均达到最大值,分别为903. 27 N和78. 70%。研究还表明,PGase处理后小麦面筋蛋白与水相互作用增加,从而提高了脱酰胺小麦面筋蛋白热诱导凝胶中非可冻结水含量。扫描电镜结果显示PGase脱酰胺结合热诱导处理的小麦面筋蛋白形成了更加有序的凝胶网络结构。     

热风干燥型方便米饭品质评价方法及原料适应性

选用12个品种的大米制作热风干燥型方便米饭,分析了原料大米的成分、米饭蒸煮品质指标,以及物性指标(Texture Profile Analysis,TPA)与方便米饭感官指标之间的关系。结果表明,物性指标中的硬度与总分、滋味、形态呈显著的负相关性;黏着性与总分、口感呈显著的负相关性,与滋味呈极显著负相关;蛋白质含量与方便米饭的滋味、总分呈显著性负相关,与口感呈极显著负相关;直链淀粉含量与方便米饭的滋味、口感呈极显著负相关,与总分呈显著负相关。利用TPA试验可以辅助感官评价试验对感官品质进行评价,大米的直链淀粉含量和蛋白质含量对热干方便米饭滋味、口感、总分有显著的影响,选用直链淀粉含量较低和蛋白质含量较低的粳米制作的热干方便米饭其食用品质较好。     

米根霉原生质体电融合条件研究

以米根霉突变株mut-A、mut-B为亲本,采用双亲灭活标记筛选融合子,对亲本灭活条件、原生质体电融合条件进行了研究。实验结果表明,0.6mol/L山梨醇溶液为最适的渗透压缓冲液,mut-A、mut-B的灭活条件分别为50℃加热6min及紫外照射180s。原生质体在电场中排队所需的细胞浓度为1×107/mL,交变电场电压为8V;最佳的电融合参数为直流脉冲电压260V,脉冲持续时间40μs,脉冲次数2次;最高融合率可达7.29±0.71%。     

小麦醇溶蛋白/卵磷脂复合纳米粒子制备Pickering乳液研究

以小麦醇溶蛋白和卵磷脂为原料,利用pH循环法制备小麦醇溶蛋白/卵磷脂复合纳米粒子,并以此为稳定剂制备Pickering乳液。探究了纳米粒子质量分数、油相体积分数对Pickering乳液的粒径、微观形貌、乳析稳定性、储藏稳定性及流变学特性的影响。结果表明：制备的Pickering乳液为水包油型乳液。当小麦醇溶蛋白/卵磷脂质量比为2∶1时,Pickering乳液的乳化活性和乳化稳定性分别为9.33 m²/g和93.33%。固定油相体积分数为50%,当纳米粒子质量分数由0.1%增加到2.0%时,Pickering乳液的粒径由56.19μm减小到36.57μm,乳析指数由46.5%增加到91.0%;固定纳米粒子质量分数为1.5%,当油相体积分数由20%增加到60%时,Pickering乳液的粒径由31.43μm增大到38.79μm,乳析指数由54%增加到93%。流变学结果表明,乳液的表观黏度和弹性性能随着纳米粒子质量分数以及油相体积分数的增加而增加,且都具有剪切稀化的现象,形成了凝胶网络结构;环境应力稳定性实验表明,Pickering乳液具有良好的NaCl离子稳定性。