PCR法检测鱼及其制品中的鱼源性成分

目的:建立一种快速、特异、灵敏的鱼源性成分聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据鱼线粒体基因组12S r RNA中的保守序列设计鱼源性特异性引物,进行PCR扩增,建立鱼源性成分检测方法;对24种鱼及鸡、牛、羊、猪、鸭、虾6种常见的易混于鱼制品的动物源性成分进行特异性检测;将草鱼肉混入其他动物肉中,混合均匀后提取DNA进行PCR扩增,确定肉样水平的检测灵敏度;将草鱼DNA混入其他动物DNA中,以混合后的DNA为模板进行PCR扩增,确定DNA水平的检测灵敏度。结果:该方法能特异性的对鱼源性成分进行快速检测,检测灵敏度达0.5%。结论:该方法能对食品中是否含有鱼源性成分进行初筛,到达快速检测的目的,对防止食品掺假、维护消费者利益、规范市场秩序有重要意义。     

不同食品加工方式对提取鮟鱇鱼肉DNA的影响

目的研究不同食品加工方式对提取鮟鮟鱼肉DNA的影响。方法以实时荧光PCR方法检测鮟鮟鱼成分标准为例,采取水煮、微波、油炸3种处理方式,选用试剂盒提取DNA,利用核酸蛋白测定仪测定其在260 nm、280 nm处的吸光度,通过A260来计算核酸浓度,A260/A280来评估核酸的纯度。以提取的DNA为模板,进行实时荧光PCR扩增。通过Ct值判断不同加工方式对实时荧光PCR结果的影响。结果水煮、微波、油炸3种加工方式中,油炸对DNA的影响最明显,当在高温下油炸时间过久会导致鱼肉焦糖化反应及蛋白质变性严重,变成具有一定孔隙的焦状物,此时鱼肉在提取DNA的过程中难以消化,造成DNA提取量少,最终导致实时荧光PCR结果假阴性。而水煮、微波两种加工方式即使处理时间过久也没有对实时荧光PCR结果产生明显影响。结论在鱼制品使用实时荧光PCR方法检测时,应充分考虑加工方式对鱼制品DNA的影响。