负载白藜芦醇的大麦醇溶蛋白/海藻酸丙二醇酯复合纳米颗粒的制备及表征

以大麦醇溶蛋白(hordein)、海藻酸丙二醇酯(PGA)为原料，通过溶剂蒸发法制备大麦醇溶蛋白-海藻酸丙二醇酯复合纳米颗粒(Hordein/PGA)，并对白藜芦醇进行包封。结果表明，随海藻酸丙二醇酯添加量的增加，Hordein/PGA的粒径由1 654.9 nm逐渐下降至475.9 nm。同时Hordein/PGA的电位均为负值，并随海藻酸丙二醇酯添加量的增大由-3.62 mV下降至-8.04 mV。红外光谱结果显示:大麦醇溶蛋白与海藻酸丙二醇酯主要通过氢键、静电吸引及疏水相互作用结合。以Hordein/PGA1∶1对白藜芦醇进行包封，构建三元复合纳米颗粒(Hordein/PGA/Res)，白藜芦醇的包封率可达87%。红外光谱和X射线衍射分析表明白藜芦醇与大麦醇溶蛋白、海藻酸丙二醇酯有效结合。Hordein/PGA/Res经85 ℃处理30 min后白藜芦醇保留率为88%，显著高于游离白藜芦醇保留率(73%)；经6 h紫外光辐射处理后白藜芦醇保留率可提高约16%。     

中国不同地区畜禽水产品硒含量分析

目的:检测中国不同地区普通和富硒猪肉、鸡肉、鱼肉中总硒含量,为评估居民硒摄入量以及指导富硒产业发展提供依据。方法:2017年7—9月采集中国10个地区代表城市普通和富硒样品共516份,采用原子荧光光谱法测定总硒含量。结果:普通和富硒产品中,鱼肉总硒含量最高,其次猪肉,鸡肉与猪肉接近;西安三种产品总硒水平最高,克山和安康总硒水平最低。富硒产品与普通相比,猪肉和鸡肉总硒水平显著提高,富硒鱼肉略高于普通鱼肉。结论:鱼肉是很好的居民膳食硒来源,但富硒作用不显著;富硒猪肉和鸡肉产业发展不平衡,亟需制定相应的科学技术与国家相关标准。     

新型转基因植物及其食用安全性评价对策研究进展

随着转基因技术的快速发展,以药用、工业用为代表的新一代转基因植物及复合性状转基因植物不断涌现。与此同时,对其进行食用安全性评价的技术体系却明显滞后。本文主要对药用、工业用及复合性状转基因植物的研究进展进行综述,并对其食用安全评价对策进行阐述和分析,以期为促进我国转基因技术的健康发展提供一定的技术支持。     

用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达重组 猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂

目的构建组成型表达重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂(kiwi pectin methylesterase inhibitor, kwPMEI)的毕赤酵母(P．pastoris)GS115工程菌株,探索碳源(葡萄糖、甘油、甲醇)对重组菌表达kwPMEI的影响,纯化kwPMEI并鉴定其对番茄果胶酶的抑制活性。方法应用PCR方法从P．pastoris GS115染色体中扩增了三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP),以其取代诱导型表达载体pPIC9K-kwPMEI上的醇氧化酶启动子(pAOX1),构建了组成型表达载体pGAP9K-kwPMEI,并转化至GS115中。用Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析目的蛋白表达情况,镍柱亲和层析纯化目的蛋白,并用凝胶扩散方法鉴定其抑制活性。结果重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达了kwPMEI,48h即达到最大表达水平,表达量约为66 mg/L。并且以甘油为碳源时kwPMEI表达量最高。成功分离纯化了kwPMEI,并经凝胶扩散方法检测表明其具有抑制活性。结论成功构建了组成型分泌表达kwPMEI的毕赤酵母菌株,为kwPMEI在果蔬汁中的进一步应用奠定了基础。     

小干扰RNA技术及其介导的转基因食品安全性评价

小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)是一种碱基长度为21～24 bp的双链RNA,其主要生物学功能是参与RNA干扰(RNA interference, RNAi)。RNAi是调节基因表达的一种保守机制,通过靶向降解mRNA或阻止mRNA翻译为蛋白质来实现基因沉默。siRNA的检测方法主要有实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)、转录组学(RNA-seq)、诺瑟杂交(northern blot)、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)、质谱法等,主要以"实质等同性"为原则对转基因农产品进行安全性评价。RNAi在改良农作物的遗传特性、提高农产品的营养价值方面发挥出巨大潜力,目前全球已有43个国家批准了转基因作物的商业化种植。但是,自从转基因食品商业化以来,社会及公众对于其安全性的争论一直在持续。本文介绍了siRNA介导的RNAi的机制、siRNA检测技术、siRNA介导的RNAi转基因食品安全评价的生物学基础及研究进展,旨在为今后评价siRNA介导的RNAi转基因食品的安全性提供理论参考,且为今后转基因农作物的产业化发展奠定基础。     

重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂的抑制活性研究

猕猴桃的果胶甲酯酶抑制剂可有效抑制不同种类植物的果胶甲酯酶活性。主要研究在巴斯德毕赤酵母中成功表达的重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂(被命名为kWPMEI)的抑制活性。通过研究发现,kWPMEI对桔子果胶甲酯酶的抑制活性最强,其次是胡萝卜,最弱的是番茄。同时kWPMEI对上述三种植物果胶甲酯酶的抑制活性受环境温度和pH的影响比较显著。     

源于GAP启动子的毕赤酵母组成型表达系统的研究进展

巴斯德毕赤酵母表达系统是目前应用非常广泛的外源基因真核表达系统。与源于醇氧化酶启动子(pAOX1)的诱导型表达系统相比,源于三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP)的毕赤酵母组成型表达系统在表达外源蛋白时不需使用甲醇,表达时间短,并且在高密度发酵时采用连续发酵模式,因此成为近年研究的热点。本文分别从pGAP表达载体的构建、碳源、基因拷贝数、信号序列、高密度发酵等方面对该表达系统进行了综述,以期为其在蛋白生产中的深入研究和应用提供参考。     

板栗壳多酚的超声波辅助低共熔溶剂提取工艺优化及其成分分析

采用低共熔溶剂（Deep eutectic solvents,DESs）-超声波辅助提取法对废弃板栗壳中的多酚进行提取并进行成分鉴定。本实验成功合成8种不同的DESs,并用傅里叶红外变换光谱表征氢键供体和氢键受体之间氢键的形成。基于单因素实验,采用响应面法优化超声波功率、液固比、低共熔溶剂水分含量三个因素对总酚得率的影响,经大孔吸附树脂纯化后进行多酚成分鉴定。结果表明,8种DESs中,氯化胆碱-草酸（摩尔比1:1）合成的DES-1总酚得率最高,且明显高于传统溶剂（水和40%乙醇）;最佳提取工艺参数为:超声波功率348 W、液固比42:1 mL/g、水分含量32%,总酚得率为（99.66±2.63） mg/g,与理论总酚得率99.44 mg/g接近,采用AB-8大孔树脂从DESs提取物中回收多酚,回收率高达97.92%±1.78%。UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS从粗提物中初步鉴定出13种酚类物质。本研究提供了一种绿色、高效的从板栗壳中提取多酚的方法,可为板栗壳废弃物的开发利用提供技术支撑。     

固相微萃取技术分析番茄香气成分的方法建立

除了酸甜苦咸四种基本味觉外,消费者选择食品时,食品所释放出来的香气也是一个考虑因素。通过固相微萃取结合气相色谱技术,可以很好地分离和鉴定番茄中的香气成分,最佳测定条件是:固相微萃取萃取头选用CW/DVB,吸附时间是25min,吸附温度为40℃,解析时间为4min,采样瓶中样品量为6g;气谱条件是:不分流进样,色谱柱为极性柱,采用程序升温进行分离鉴定。     

不同发酵条件对重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂表达量的影响

将已在毕赤酵母中成功表达的重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂为研究对象,通过改变发酵培养时间、培养基装填量及培养基配方,对该重组蛋白的表达量进行研究。最终确定使用BMMY培养基、表达时间为96h、培养基装填量为10%时为最佳表达条件,在最佳表达条件下,该重组蛋白的表达量最高可达0.2g/L。