金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因分布及分型研究

目的 对2006-2009年上海市Staphylococcus aureus(S.aureus)食品分离株进行肠毒素基因检测和基因分型研究,以了解肠毒素基因的分布规律及S.aureus的流行特点.方法 利用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因,包括5种传统肠毒素基因(SEA-SEE)和4种新型肠毒素基因(SEG-SEJ);利用脉冲场凝胶电泳法对49株食品分离株进行基因分型.结果 本研究发现49株食品分离株中有19株含有肠毒素基因,16株含有传统肠毒素SEA和SEC,且SEC占93.8％,并检测到新型肠毒素SEG、SEI、SEJ和SEH.PFGE法基因分型显示5株菌不能被分型,其余44株可分为28个基因型,表现为基因型的多样性,且分离自不同时间的菌株具有相同的带型.结论 应加强食品中S.aureus的监测分析,为其引起的食物中毒的预防和控制提供科学依据.     

基于全基因组测序技术的食品分离致泻大肠埃希菌的分子特征及耐药性研究

目的 了解上海市肉品和水产品中分离致泻大肠埃希菌（DEC）的生物学特征及耐药性，为防控由该菌引起的食源性疾病提供科学依据。方法 对食品分离DEC菌株进行全基因组测序及药物敏感性试验，利用BioNumerics软件对全基因组测序数据进行拼接，利用拼接序列开展多位点序列分型、毒力基因和耐药基因分析。结果 本研究中56株DEC菌株中肠道聚集性大肠埃希菌（EAEC）占比最高，达73.2%，且以astA基因为主（90.2%）。56株DEC分为37个ST型，显示高度多样性。DEC菌株对喹诺酮类抗生素耐药性较高（64.3%），其次是对氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素和四环素类抗生素耐药，且多重耐药性菌株占48.2%，耐药基因相应的以喹诺酮类、氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素耐药基因为主，且大多数对抗生素耐药的菌株均携带其相应的耐药基因。结论 EAEC是上海市食品中分离DEC菌株的主要型别，对喹诺酮类、β-内酰胺类、氨基糖苷类抗生素的耐药率较高，且携带相应的耐药基因，全基因组测序技术可应用于DEC的分子生物学监测中，为疾病预防控制提供科学依据。     

2016年上海市市售肉制品中沙门菌耐药谱与分型研究

目的 研究上海市市售肉制品中沙门菌血清型、耐药谱和分子分型特征。方法 2016年1～8月在上海市所辖16个行政区,随机选择1个密集型社区,抽取1家超市或市场作为哨点,定期采集畜、禽类肉制品,按国家食品安全风险评估中心(CFSA)食源性疾病监测方案进行沙门菌分离、血清分型、抗生素定量检测与剂量评估、优势菌的分子分型。结果 606份样品包括猪、鸡、鸭、牛、羊、鹅肉制品,共分离沙门菌158株,总阳性率为26.1%,畜肉和禽肉来源分别占52.5%(83/158)和47.5%(75/158)。前5位沙门菌血清型依次为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌、罗森沙门菌和印第安纳沙门菌,畜肉和禽肉来源优势菌型间差异有统计学意义(P<0.05);菌株对磺胺异噁唑耐药率最高(79.7%,126/158),对链霉素、萘啶酸、氨苄西林、四环素和氯霉素耐药率在38.0%～77.8%,多重耐药(MDR)菌株(≥3类)占77.8%(123/158),猪肉来源沙门菌对庆大霉素、链霉素、磺胺异噁唑、复方新诺明、氯霉素、四环素耐药率均高于鸡肉来源沙门菌,鸡肉来源沙门菌对头孢噻呋、头孢曲松、萘啶酸耐药率均高于猪肉来源沙门菌,差异均有统计学意义(P<0.05),32.9%(52/158)的菌株对至少6种抗生素超检测限值;肠炎沙门菌有15个分型,以1型和3型为优势型;鼠伤寒沙门菌有23个分型,具有遗传多样性特征。结论 上海市市售肉制品沙门菌暴露以猪肉和鸡肉来源为主,肉制品中多重耐药沙门菌污染严重。猪肉来源的罗森沙门菌和鸡肉来源的吉韦沙门菌是新输入性的血清型。     

上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素细菌分布及耐药基因谱研究

目的 了解上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素细菌的分布及抗生素耐药基因谱。方法 采用美洛培南抗性平板筛选上海市市售水产品中耐药性细菌,利用微生物质谱鉴定仪对其进行鉴定,同时对上述分离细菌进行药敏性实验,对多重耐药菌进行全基因组测序,分析耐药基因谱。结果 上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素的耐药细菌分离率较高（75.0%~90.5%）,嗜麦芽窄食单胞菌为优势细菌,其次为假单胞菌属、气单胞菌和肠球菌;多重耐药现象比较严重,表现出对头孢类、四环素类、氨苄西林较高的耐药性。全基因组测序结果显示共检测出64个耐药基因,耐碳青霉烯酶基因以bla_NDM-1、bla_OXA55和bla_OXA280为主。结论 上海市市售水产品中耐碳青霉烯类细菌分布较为广泛,同时存在多重耐药现象,且携带的耐药基因谱呈多样性,提示应加强水产品中耐药细菌及耐药基因谱的监测,为食品安全评估提供依据。     

翻白草水提液对离体肝细胞糖代谢影响的研究

本实验研究了翻白草水提液对离体肝细胞糖代谢的影响。结果表明:翻白草水提液不仅能显著促进胰岛素抵抗原代小鼠肝细胞的葡萄糖代谢(p<0.05),而且还能显著提高正常小鼠肝细胞对葡萄糖的吸收和利用(p<0.01)。实验表明含有5×10-7mol/L胰岛素的DMEM培养液可成功制备胰岛素抵抗原代小鼠肝细胞模型;固形物含量为0.9mg/ml的翻白草水提液能更好的促进离体肝细胞对葡萄糖的吸收和利用。     

克罗诺杆菌属食品分离株种水平鉴定方法比较研究

目的研究食品中分离克罗诺杆菌属种的鉴定方法,旨在建立稳定、可靠的种的鉴定方法。方法本研究选择三种鉴定方法,包括生化鉴定(VITEK 2 Compact)法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、全基因组测序,通过比较分析三种方法对19株克罗诺杆菌属的鉴定结果,阐述三种鉴定方法的优缺点及其适用性。结果本研究中19株克罗诺杆菌属的鉴定结果显示,VITEK 2 Compact对阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐克罗诺杆菌的鉴定准确率只有67%和66%,而MALDI-TOF MS和全基因组测序的鉴定结果一致,因此可以判定MALDI-TOF MS能够快速、准确、高通量对克罗诺杆菌属进行种的鉴定。但是MALDI-TOF MS受限于数据库,不能鉴定到亚种的水平。结论本研究结果提示VITEK 2 Compact法不适用于克罗诺杆菌属种的鉴定;全基因组测序鉴定结果准确可靠;MALDI-TOF MS可以实现快速、高通量、准确的鉴定,仍需要进一步研究克罗诺杆菌属3个亚种的蛋白指纹图谱特点,丰富蛋白指纹图谱数据库,使其能够准确鉴定克罗诺杆菌属的7个种和3个亚种。     

一起疑似由蜡样芽胞杆菌引起的食源性疾病事件的分子溯源研究

目的 对一起食源性疾病事件中食品分离蜡样芽胞杆菌（B. cereus）进行溯源分析,为确定污染源、切断传播途径提供技术支撑。方法 本研究建立脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,对12株B. cereus进行分子分型,同时对10株B. cereus进行全基因组测序（WGS）,利用BioNumerics软件对测序数据进行拼接组装、多位点序列分型（MLST）、毒力基因、核苷酸多态性（SNP）分析。结果 本起食源性疾病事件中分离自不同食品的12株B. cereus的PFGE分型显示为8种带型,其中3株ST1435型 B. cereus带型相同,且SNP分析显示这3株B. cereus只有3个碱基差异;2株ST24型B. cereus 的PFGE带型完全相同,且SNP分析显示只有1个碱基差异,提示3株ST1435和2株ST24菌株分别为克隆株。2株ST24型B. cereus携带溶血性肠毒素hlbA、hlbC和hlbD,另有4株B. cereus携带腹泻毒力基因（hlbA、hlbC和hlbD）。结论 B. cereus引起的食源性疾病事件比较复杂,污染源也比较复杂,因此加强原辅料监测、从业人员的卫生监测、环境和设备及环节的清洗消毒,对预防控制由其引起的食源性疾病事件非常重要。     

2009—2012年上海市副溶血性弧菌血清分型研究

目的 了解2009-2012年期间上海市副溶血性弧菌临床菌株和水产品分离株的血清型分布.方法 采用血清玻片凝集试验对622株临床菌株和176株水产品分离株进行血清分型.结果 622株副溶血性弧菌临床菌株可分为27个血清型,其中以O3∶ K6型为主,约占61.7％.176株副溶血性弧菌水产品分离株可分为9个O群,其中O1、O2、O3、O4和O5群为主要血清型,约占72.2％.水产品分离株与临床菌株的血清型差异较大,但在水产品中检测到2株临床菌株的优势血清型O3∶ K6.结论 2009-2012年期间上海市副溶血性孤菌临床菌株和水产品分离株的血清型均呈现高度多样性,O3∶ K6型是引起食物中毒的优势血清型,而水产品分离株未见优势血清型.临床菌株优势血清型O3∶K6在水产品中的出现,提示上海市水产品存在潜在的致病危险,需要加强监控,为疾病的预防和控制提供依据.     

基于全基因组测序的蜡样芽孢杆菌食品分离株分子特征及耐药性研究

目的 研究上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的基因组特征及其耐药性。方法 本研究对上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌进行鉴定、药物敏感性实验和全基因组测序,利用BioNumerics软件对测序数据进行拼接组装,利用拼接数据进行多位点序列分型(MLST)、毒力基因和耐药基因分析,并与PubMLST数据库中的ST型进行比较;对耐药基因和耐药表型进行比较分析。结果 本研究中37株蜡样芽孢杆菌均可分型,其中7株为ST新型。37株蜡样芽孢杆菌分为34个ST型,其中3株菌为ST26型,其余ST型各占1株,呈高度多样性。37株蜡样芽孢杆菌均携带nheA、nheB、nheC基因,hblACD基因簇的携带率为37.8%,而完整ces呕吐基因簇的携带率只有16.2%,其中2株为分离自即食食品的ST26型。药敏实验显示37株蜡样芽孢杆菌对氨苄西林、青霉素和苯唑西林耐药性较高,与其携带耐药基因种类并不完全一致。结论 上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌菌株分子分型呈现高度多样性,应加强食品中蜡样芽孢杆菌分子生物学监测,为预防控制由其引起的食源性疾病提供科学依据。     

基于全基因组测序的阪崎克罗诺杆菌婴幼儿食品分离株分子特征研究

目的 研究婴幼儿食品中分离的阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)分子生物学特征。方法 对婴幼儿食品中C.sakazakii进行分离鉴定、药物敏感性试验和全基因组测序,利用BioNumerics软件对全基因组数据进行拼接组装,对组装基因组开展多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、毒力基因和耐药基因分析,并与PubMLST数据库中ST型进行比较分析。结果 本研究中分离的9株C.sakazakii共分为5个ST型,ST1和ST64型为主要型别,同时也是PubMLST数据库中C.sakazakii的主要型别。3株C.sakazakii携带mcr-9耐药基因,但药敏结果显示所有菌株对包括多粘菌素B和多粘菌素E在内的12种抗生素均敏感。除携带共同毒力基因谱外,ST1、ST64和ST458型携带脂多糖基因gtrB。cgMLST聚类分析显示,9株C.sakazakii呈高度多样性。结论 与临床分离株相关的ST1和ST64型是本研究食品分离株中的主要型别,提示C.sakazakii具有潜在的致病性,有必要对婴幼儿食品中C.sakazakii开展连续监测,为预防控制由其引起的食源性疾病提供依据。