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本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件。结果显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体。氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40%。该酶的最适pH和温度分别为8.5和80℃,且当金属离子Zn2+存在时,重组MDH的活力提高到对照组的260%。此外,重组MDH在75℃孵育6 h后仍可保留超过85%的残留活性,热稳定性较高,比大多数MDHs的活性高。底物特异性研究表明其对D-果糖具有较高的专一性。重组MDH催化D-果糖的米氏常数(Km)和催化效率(kcat/Km)分别为20 mmol/L和7.5 L/(mmol·min)。重组MDH在以400 mmol/L的D-果糖为底物的反应系统中,可将80%以上的D-果糖转化为甘露糖醇。通过对反应条件的优化,为后续工业化生产制备甘露醇奠定了基础。 相似文献
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为获得可高效生产褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶,该文筛选出一种来源于Microbulbifer salipaludis的褐藻胶裂解酶(Microbulbifer salipaludis alginate lyase,Misa-aly),并在大肠杆菌 Escherichia coli BL21(DE3)异源表达,分离纯化后进行酶学性质鉴定。结果表明,该酶最适pH值为8.5(Tris-HCl缓冲液),最适温度为45℃,偏好底物为聚甘露糖醛酸,40℃下保温1 h酶活下降约50%。Misa-aly对Na+依赖性较低,以海藻酸钠为底物通过3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法测定酶活为(53.0±1.2)U/mg,反应产物是聚合度为2~4的寡糖,24 h后酶解转化率达到94.7%,底物海藻酸钠几乎全部酶解。 相似文献
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目的 挖掘呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)降解酶,应用双酶体系实现呕吐毒素的高效降解。方法 利用生物信息学技术从NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库筛选潜在DON降解酶AKR18A2,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行重组和IPTG诱导表达,经镍亲和层析纯化并鉴定了AKR18A2的酶学性质。随后构建德沃斯氏菌(Devosia sp.)来源的DON降解酶(QDDH)和AKR18A2双酶作用体系,实现DON的高效降解。结果 鉴定了来自鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)的呕吐毒素降解酶(AKR18A2),由343个氨基酸组成。该酶属于醛酮还原酶超家族,最适反应条件为40℃和pH 7。尽管AKR18A2对呕吐毒素的4 h降解率仅为15%,但是双酶(QDDH和AKR18A2)协同作用4 h后便能够将对DON的降解率可提高至98%。结论 本研究鉴定了一种新型DON降解酶AKR18A2,并首次创新建立双酶联用体系进一步实现DON的高效降解,为解决食品及饲料中的DON污染提供了新的生物资源。 相似文献
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用气相色谱TCD和FID检测器对多氯乙酰氯及其酸化产物的成分和纯度进行了分析,用正丙醇对其进行衍生化,酯化率大于99.6%.生成的酯化产物用毛细管色谱法分析,分离效率高、重现性好、检测结果准确可靠,9次分析的变异系数为0.45%,在工业产品的检测中取得满意的结果. 相似文献
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本文合成并表征P2Mo17Ni、P2Mo17Cr、P2Mo17Co和P2Mo18 4种Dawson型多金属氧酸盐,通过循环伏安法研究不同多酸浓度和不同扫速下4种多酸水溶液的电化学性能,并在适宜条件下催化不同浓度的酪氨酸酶,研究多金属氧酸盐水溶液对酪氨酸酶的催化作用,研究果表明:4种化合物的氧化还原过程均属于扩散控制过程,对酪氨酸酶的电化学传感均显示出良好的稳定性,且响应电流与酪氨酸酶含量之间具有良好的线性关系,其中P2Mo17Ni的检测效果是4种化合物中最优的。通过计时安培曲线可知P2Mo17Ni对酪氨酸酶的最低检出限(S/N=3)可以达到0.4095 U/mL。将此方法应用于对虾中酪氨酸酶含量的检测,样品的回收率为98.0477%~99.5872%。此方法的选择性好,在多种干扰物质共存时,其检测结果几乎不受影响。这说明该修饰电极具有较高的准确性和稳定性。本研究为用此法检测南美白对虾及其它水产品中的酪氨酸酶含量,进而实现对它们的质量评价提供理论依据。 相似文献
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本文旨在对来源于Thermoprotei archaeon菌株的D-LI(最适pH6.5)进行弱酸特性改造,以期该酶在pH5.5条件下生产D-甘露糖,从而抑制原有的美拉德反应,减少分离成本。基于蛋白序列比对及酸碱氨基酸置换策略,首先设计了8个单点突变,而后从中选择3个优良单点突变体E82K、P105K、E165K进一步进行两两组合双点突变。结果表明双点突变体E82K/P105K较野生酶的最适pH由6.5迁移至6.0,且在pH5.5条件下的酶活是原始酶的3.4倍。该突变体在以D-果糖和D-甘露糖为底物时的动力学参数Km值分别为78.77 mmol/L和328.12 mmol/L,kcat/Km值分别为15.37 mmol/L?1·min?1和48.92 mmol/L?1·min?1。以80 g/L的D-果糖为底物反应10 h后,双点突变体E82K/P105K在pH5.5反应时的转化率较接近于原始酶在pH6.5时的转化率,美拉德反应程度较原始酶降低了约3~4倍,为工业上利用D-LI生产D-甘露糖提供了可行的酶制剂。 相似文献
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珠海发电厂循环水泵房工程中,在人工填海块石层上进行防渗处理。由于该地层块石含量多、块大、质硬且受海潮水位涨落影响,施工难度大。针对这一特殊地层,采用高喷灌浆施工工艺,保证了质量,与其他工艺相比,速度快且造价低。 相似文献
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中国农业大学是用能大户,据统计,随着燃气价格的增涨,我校每年供暖所消耗的能源费用已经占到全校总体能源经费的40%。因此,对既有的供暖系统进行节能改造显得非常必要。2006年,学校聘请了节能专家对供暖系统进行了性能以及能耗诊断,提出了详 相似文献
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