免疫金银染色法快速检测水产品中孔雀石绿残留的研究

目的研究一种快速、稳定地检测水产中孔雀石绿残留的方法。方法基于胶体金免疫层析技术,采用竞争法,以硝酸纤维素(nitrocellulose,NC)膜为载体,以孔雀石绿单克隆抗体为标记蛋白,制备一种金标免疫层析试纸条用于渔药残留快速检测,同时用免疫金银染色法提高试纸条的灵敏度。结果该检测系统选用20nm直径的胶体金用于标记抗体,最适p H为9.0,最适蛋白结合量为每1 m L胶体金结合15μg抗体蛋白。标记成功的抗体以1:10比例稀释并取20μL固定到用PBS(0.01 mol/L,10%蔗糖,0.05%吐温-20)预处理过的玻纤膜上,作为金标垫。用于包被NC膜的抗原与二抗浓度分别为3 mg/m L和0.7 mg/m L。用免疫金银染色法放大显色信号,制备的试纸条检出限为0.2 ng/m L,并应用到实际鱼样的检测中。整个测试时间约为10 min。结论本方法重现性良好,且置于室温环境下保存90 d后仍稳定可靠,为水产品中孔雀石绿残留的快速检测提供了一条可行途径。