应用EHF cDNA探针检测人用鼠源性杂交瘤细胞和单抗制剂

从R3 克隆中提取并纯化流行性出血热R2 2 株M片段cDNA ,用光敏生物素标记而制备出生物素化的cDNA探针。用此探针与R2 2 株、76 118株及R3 克隆进行斑点杂交 ,均出现阳性杂交信号 ,而与仙台病毒、鼠肺炎病毒及BALB/c小鼠肝细胞、Vero E6细胞和SP2 / 0细胞杂交均为阴性。探针的灵敏度为 2 5pg目的核酸。用此探针测定了来自 9个单位 12株人用鼠源性杂交瘤细胞和 7个单抗制剂均为阴性。该结果与血清学检验结果一致     

常用开放实验小鼠群MHV抗体的监测及其病原传播的探讨

作者应用ELISA,连续7年对本所动物繁育场、部分省市药厂、防疫等部门的各级鼠群进行了MHV抗体检测,发现MHV感染非常普遍。对病原的分离和鉴定证明,所分离的病原物确系MHV。作者还对MHV的垂直传播进行了探讨。     

汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用

目的　获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法　采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 0 Z10trNP ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物经Glu tathioneSepharose 4B柱纯化 ,并进行抗原性及抗原特异性检测。结果　pGEX2 0 Z10trBP表达产物是相对分子质量约为 4 0 0 0 0的谷光甘肽转移酶 (GST)融合蛋白GST Z10trNP。经Westernblot分析 ,GST Z10trNP具有良好的抗原性。用纯化GST Z10trNP为抗原 ,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清 ,均能很好地区分阴性和阳性血清。结论　GST Z10trNP表达量高 ,易于纯化 ,并且具有良好的抗原性及抗原特异性 ,是一种安全、廉价的诊断抗原。     

多价鼠肝炎病毒抗体ELISA试剂盒的研制及应用

从6株鼠肝炎(MHV)病毒中筛选出A_(59),MHV_1及沪-79(Sh-79)3个毒株制成多价抗原的ELISA试剂盒。检测SPF和清洁级小鼠血清104份,又为0.037,SD为0.024,阳性临界值为0.207。经电镜检查,阻断抑制试验和IFA验证,证明本试剂盒特异性好。应用本试剂盒检测实验鼠群MHV抗体的敏感性单价抗原强。开放鼠MHV抗体阳性率为72％(161/223),Ⅱ级和Ⅲ级鼠为1.7％(2/117)。     

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

目的建立猪细小病毒(PPV)PCR检测方法。方法设计一对针对PPV的特异引物,经方阵滴定法确定PCR检测的最佳条件,以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行斑点杂交鉴定。提取已知滴度的病毒培养物DNA为模板,稀释后进行PCR扩增,测定PCR方法的敏感性。采用此方法检测了180份猪各种组织样品的DNA及PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型。结果仅PPV野毒株和北京分离株AV7909能够扩增出一条531bp的片段,测序结果证明为PPV的特异片段。该方法所能检测的最小病毒滴度值为0.398TCID50,可以检测出PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型中0.500 TCID50的感染量。180份组织样品均未检出PPV。结论该方法具有良好的特异性和敏感性。     

3R理论的形成、发展及在生命科学研究中的应用

<正>一、3R理论的形成及发展3R是Reduction（减少）、Replacement（替代）和Refinement（优化）的简称。     

应用光敏生物素标记探针检测杂交瘤细胞中小鼠白血病病毒

采用BamHⅠ酶切和琼脂糖凝胶电泳技术，从重组质粒pSF11中回收5kb小鼠白血病病毒（MuLv）DNA片段，用光敏生物素标记制备DNA探针，采用斑点杂交法检测杂交癌细胞，McAb纯品以及SP2／0细胞中的MuLv。结果表明，此探针特异性好，灵敏度可达25pg。在检测的13株杂交瘤细胞和2株SP2／0细胞中分别有5株和1株为MuLv阳性，在McAb纯品中未查出MuLv。     

反转录-嵌套式聚合酶链反应检测乙脑病毒

为进一步发展JEV分子诊断技术，本文应用嵌套式RT-PCR方法检测人用猪源性生物制品中外源性JEV，现将结果报告如下。     

汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达

目的　获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法　应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果　Dot-ELISA检测为阳性。结论　成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。