重组贻贝黏蛋白的体外抗氧化及抗炎活性评价

试验旨在探究重组贻贝黏蛋白的体外抗氧化能力，并采用IFN-γ诱导的人皮肤成纤维细胞(HFF-1)炎症模型评价其抗炎作用。首先，以谷胱甘肽(GSH)作为对照，评价不同质量浓度重组贻贝黏蛋白的体外抗氧化能力。此外，采用不同浓度的重组贻贝黏蛋白或不同浓度IFN-γ及IFN-γ(10 ng/mL)+重组贻贝黏蛋白(30μg/mL)处理HFF-1细胞，动态观察细胞增殖、肿瘤坏死因子(TNF-α)的释放以及重组贻贝黏蛋白对炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)表达的影响。结果表明：重组贻贝黏蛋白具有较强的还原力，主要对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(·DPPH)和羟自由基(·OH)的清除起作用，而对超氧阴离子(·O₂^-)几乎不起作用。此外，重组贻贝黏蛋白显著促进细胞增殖，且重组贻贝黏蛋白的加入可在蛋白水平和mRNA水平显著抑制IFN-γ诱导的IL-6、IL-8和MDC的表达(P≤0.05)。总之，重组贻贝黏蛋白可一定程度上发挥抗氧化和抗炎作用，从而促进伤口愈合。这均与重组贻贝黏蛋白可清除·...     

人热休克蛋白10在毕赤酵母中的表达及纯化

目的在毕赤酵母中表达及纯化人热休克蛋白10(heat shock protein 10,Hsp10)。方法取新鲜人胎盘组织提取总RNA,反转录合成c DNA。以其为模版PCR扩增Hsp10基因片段,构建外分泌重组表达载体pPIC9KHsp10,电击转化毕赤酵母GS115菌株,经组氨酸缺陷筛选,获得阳性菌株pPIC9K-Hsp10/GS115。重组菌经甲醇诱导,SDS-PAGE检测蛋白含量,Western blot分析Hsp10特异性。结果获取了序列正确的Hsp10基因及高表达菌株。表达产物在相对分子质量11 000处可见特异表达条带,Hsp10蛋白表达量为400 mg/L,纯度大于90%;Western blot分析表明,Hsp10具有良好的反应原性和特异性。结论 Hsp10在毕赤酵母GS115中成功表达,为该蛋白的放大生产及应用奠定了基础。     

重组人超氧化物岐化酶基因工程菌稳定性研究

目的:研究重组人超氧化物岐化酶毕赤酵母基因工程菌的遗传稳定性。方法:基因工程菌连续传代50次,每10代取样保藏菌种,通过对菌株形态、菌落形态、质粒稳定性、目的基因的PCR鉴定,蛋白表达的SDS-PAGE鉴定来评价工程菌的稳定性。结果:在连续传代50代的过程中,菌株、落形态与原始工程菌相比无明显差异,质粒保有率高,PCR鉴定结果显示,重组载体携带目的基因传至50代未消失,SDS-PAGE结果表明,传至50代蛋白表达量无明显差异。结论:该工程菌有良好的遗传稳定性。