马立克氏病病毒I型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达

摘要：目的 寻找MDV-1UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能。方法 用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART（www.gcua.de）分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析确定UL13的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清;通过NCBI的protein blast功能及Cn3D 4.1在线软件分析UL13保守结构域。结果 PCR扩增出UL13基因,序列分析结果表明, UL13的259-400aa、431-513aa两个片段抗原性强,且稀有密码子较少;保守结构域分析发现UL13催化中心主要位于152-297氨基酸残基间,且在激酶Subdomain Ⅶ的保守甘氨酸残基被丝氨酸替代,SubdomainⅧ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换。利用大肠杆菌表达的UL13第259～400 aa片段免疫小鼠制备出多抗血清能与真核表达产物反应。结论 MDV-1 UL13催化中心主要位于152-297氨基酸残基间,体外表达的基因产物诱导机体产生了抗UL13激酶的特异性抗体。     

乙酰基亚硝基脲(ENU)对C57BL/6J雄鼠睾丸组织的影响

目的 观察乙酰基亚硝基脲(ENU)对雄鼠睾丸及其他组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠后的最佳配种时间.方法 将8～10周龄的C57BL/6J雄鼠分为实验组和对照组.实验组腹腔注射ENU 100 mg/kg,每周1次,共3次,对照组以同样方法注射生理盐水.首次注射ENU后的第1周至12周,每周分别取4只实验组小鼠和对照组小鼠剖检及组织病理学观察;取其睾丸附睾称重及精子计数.记录死亡小鼠数量,并对其剖检及组织病理学观察.结果 对死亡小鼠剖检发现胸腔纵隔内有巨大肿块,明显压迫心脏;组织切片观察发现睾丸和肝脏有明显病变.实验组小鼠睾丸从ENU处理的第2周起开始萎缩,第9周开始恢复;精子数量第4周至第9周稀少.结论 ENU为小鼠的一种强诱变剂,纵隔肿瘤是导致雄鼠死亡的主要原因,雄鼠注射ENU后最佳配种时间应在首次注射后的第9周.