黄地老虎颗粒体病毒的研究VI．均一完整的AsGV DNA的制备和鉴定

本文采用氯化铯密度梯度一步离心,直接从纯化包涵体抽提出均一、完整的AsGV(Agrotissegetum granulosis virus)DNA分子。电镜观察和限制性内切酶二种方法测得AsGV DNA基因组大小为112．Okb。     

黄地老虎颗粒体病毒的研究IV包涵体、病毒粒子蛋白及其血清学的特性

利用反复调等电点的方法制备的AGV—XJ的包涵体A和B蛋白在沉降分析中均边一个峰的纯度。SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳显示AsGV—xJ的包涵体A蛋白有三个条带,其分子量分别为32,000、25,5 00和22,000。B蛋白和病毒粒子蛋白都由11个结构多肽组成,其分子量范围分别为100,o。0—22,500和95,0fll一12,000。我们还对AsGV—xJ的包涵体A蛋白作了氨基酸组成的分析。免疫扩散试验表明A、B蛋白和病毒粒子间均有血清学反应。     

白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取

本文研究了不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/（NH4）2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、（NH4）2SO4浓度、离子强度、pH值及（NH4）2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化了实验条件,初步确定在PEG浓度15%,（NH4）2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3 U/mg蛋白。     

牛促卵泡激素α亚基cDNA的克隆与序列分析

从牛脑垂体中提取总RNA, 分离mRNA, 反转录获得cDNA, PCR扩增获得长为380 bp的牛促卵泡激素α亚基cDNA片段, 将它克隆于pUC19中, 进行序列分析, 结果表明: 所克隆的α亚基基因编码区序列与Erwin所发表的序列基本相同, 仅编码第24位赖氨酸的密码有差异, 同时将所获基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列与人、啮齿类的同类基因相比较, 具有很高的同源性.     

棉花叶肉原生质体的分离初报

本文简要叙述了探寻棉花叶肉原生质体分 离的适宜条件的实验结果。供试的棉花是海岛 棉（Gossypium barbadense) 76-94、陆地棉（G. hirsutum)新陆201、草棉（‘．herbaceum）红 壳草棉、中棉（G. arboreum）常紫一号。将4个 棉种分别播种于花盆中,置于室温(18-200C), 自然光照条件下。苗龄7-10天,即幼苗两片子 叶平展或第一片真叶露尖时,于花盆中大量灌 水,使细胞充分膨胀,次日剪下子叶供脱壁用。 酶液组成：不同浓度的纤维素酶Onozuka R 10 （日本产）(7.0务、6.0%, 5.0多、4.0务、3.0界）、 果胶酶Roch（英国产）(2.0多、1.5多、1.0多、 0.4%)、渗透稳压剂： 甘露醇(0.7 M, 0.6 M, 0.5 M)、附加物：硝酸按(250mg/l）和氯化钙 (780mg/l）加人酶液中或不加人。对酶液中各 成份浓度进行了组合比较试验,各处理分别用 4个棉种重复3次,每次重复镜检2-3次。     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段在枯草芽孢杆菌中的克隆

EcoRI酶解的AsGV-XJ DNA和质粒pUB 110 DNA,经T4 DNA连接酶连接后,转化枯草芽孢杆菌BR 151感受态细胞,涂布在加有新霉素(5,ug／ml)的完全培养基上。用琼脂糖凝胶电泳快速法检测抗新霉素转化子中的重组质粒。在388个转化子中得到12个较PuB110 DNA分子量大的重组质粒。所有重组质粒均可与”PdcTP标记的Fco RI酶解AsGV—XJDNA片段的探针进行分子杂交。通过琼脂糖凝胶电泳对重组质粒中插入AsGV一XJ DNA 片段进行了测定。     

产低温脂肪酶菌株Geotrichum candidum ch-3的选育、发酵条件及酶学性质研究

从新疆昌吉市油脂化工厂的含油冻土中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株ch-3,形态鉴定及18SrDNA序列分析表明该菌株为白地霉,命名为Geotrichum candidum ch-3。我们对其生长及产酶情况和酶性质做了初步研究。该菌株的最适生长温度是20℃。玉米浆、豆油可显著促进脂肪酶的产生。粗酶液经双水相萃取和Sephadex G-75凝胶过滤分离纯化后进行酶学性质的研究。该脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃可保持66%的相对酶活性,最适pH值为7.0,对热较敏感,50℃处理20min,剩余酶活为55%,Fe2＋、Cu2＋、Mn2＋以及Ca2＋对酶有较强的激活作用。     

白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达

构建了白地霉脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,为进一步进行蛋白质工程改造和脂肪酶应用奠定了基础。从新疆昌吉市油脂化工厂含油冻土中分离得到1株低温脂肪酶产生菌-白地霉ch-3。该菌发酵上清液中的脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活力。应用PCR技术从白地霉ch-3基因组DNA中克隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,将该基因与原核表达质粒载体pET-22b（＋）连接,构建重组质粒pETl-ip1,转化E.coliBL21（DE3）,酶切鉴定,筛选得到重组菌。十二烷基磺酸钠-聚丙希酰胺（SDS-PAGE）显示重组脂肪酶Ⅰ的相对分子质量约为5.8×10^4,酶活为2.73 U/mL,表明lip1基因的表达产物具有正常的生物学活性。白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能够在大肠杆菌中有效地表达。