白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取

本文研究了不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/（NH4）2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、（NH4）2SO4浓度、离子强度、pH值及（NH4）2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化了实验条件,初步确定在PEG浓度15%,（NH4）2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3 U/mg蛋白。     

从不同植物上来的几个烟草花叶病毒分离物的初步比较研究

试验比较了油菜花叶病15号分离物(YMV15),地黄退化病(DDV)分离物,毛白楊球状丛生(PV)的分离物以及烟草花叶病毒(TMVl)在寄主反应、体外抗性和血清学方面的异同。三个分离物和TMv-在心叶烟,普通烟等鉴定寄主有相似的反应,但是它们在另一些寄主上的反应又有显著的差别。例如,只有YMVt5能侵染油菜和白菜;YMV-s和DDV在菜豆上不就产生局部斑点,而TMV。和’PV却与TMv的大多数毒株一样有此反应。YMvB和DDv在卓前的接种叶上产生枯斑反应,而’rMVi和Pv且¨不表现病状。三个分离物都和TMvl一样极易通过机械接种传染而不能借桃蚜传染;井且具有相近TMV-的稀释限度(10一L一10“),但致死温度TMV-和Pv为92~(3及90℃,而YM’V15和DDV均为86qc。四个分离物的抗血清都有交互的血清沉淀反应。但YMVls与DDV之嗣的反应鞍强,TMVt与PV的反应亦较强。在交互吸收试验中证明YMVt,与DDV的抗血清中有较多的共同抗体,而TMvl与PV的抗血清中亦有较多的共同抗体。交互血清反应,寄主范围,体外抗性,传染方法,都指出它们是FMV的毒株。TMVl极接近于国外TMV的普通株,PV近似黄化奥古巴花叶毒株,YMVL15有些象Holmes的卓前株。作为TMV毒株的最大特点是它们来自与烟草相距极远的植物,因此探讨这些毒株的起源将是很有兴趣的。     

油菜花叶病毒(YMV_(15))的大小、形状、结构及其蛋白亚基的化学特征

在前此的工作中我们对于国内分离的四种烟草花叶病毒(TMV)毒株进行了比较研究,结果发现油菜花叶病毒YMV_(15)的性质最为特殊。在物化性质方面,YMV_(15)的分子很容易聚集成束,等电点较高。在化学结构方面,它的氨基酸组成中有组氨酸和甲硫氨     

大麦条纹花叶病毒(新疆株)中多聚腺苷酰核糖核酸含量、侵染活性及多聚腺苷酸链长分布的测定

1.用Oligo(dT)纤维素亲和层析将新疆大麦条纹花叶病毒(BSMV-XJ)RNA分为poly(A)~+(与Oligo(dT)纤维素结合的)RNA和poly(A)~-(不与Oligo(dT)纤维素结合的)RNA,其相对含量poly(A)~+RNA占75%,poly(A)~-RNA为25%。2.用~(32)P标记法测定了BSMV(XJ)RNA中3′端poly A的链长分布,结果poly(A)~+RNA带有数个至三十几个腺苷酸残基,而poly(A)~-RNA也含十个以下的腺苷酸残基。3.用系统感病寄主大麦进行侵染性试验表明,poly(A)~+RNA与poly(A)~-RNA对大麦具有同等水平的侵染性。4.文中讨论了Oligo(dT)纤维素的分离效果以及所用测定poly(A)链长分布方法的可靠性。     

黄地老虎颗粒体病毒的研究IV包涵体、病毒粒子蛋白及其血清学的特性

利用反复调等电点的方法制备的AGV—XJ的包涵体A和B蛋白在沉降分析中均边一个峰的纯度。SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳显示AsGV—xJ的包涵体A蛋白有三个条带,其分子量分别为32,000、25,5 00和22,000。B蛋白和病毒粒子蛋白都由11个结构多肽组成,其分子量范围分别为100,o。0—22,500和95,0fll一12,000。我们还对AsGV—xJ的包涵体A蛋白作了氨基酸组成的分析。免疫扩散试验表明A、B蛋白和病毒粒子间均有血清学反应。     

黄地老虎颗粒体病毒的研究VI．均一完整的AsGV DNA的制备和鉴定

本文采用氯化铯密度梯度一步离心,直接从纯化包涵体抽提出均一、完整的AsGV(Agrotissegetum granulosis virus)DNA分子。电镜观察和限制性内切酶二种方法测得AsGV DNA基因组大小为112．Okb。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因在杆状病毒载体与昆虫细胞体系中的表达

根据杆状病毒A组代表种苜蓿Y纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica Nuclear Po-lyhedrosis Virus,简称AcNPV)的分子生物学资料,我们采用分子剪裁和拼接手段,对AcNPV多角体蛋白基因加以修饰,并用人工合成定位探针,获得大约在该基因的ATG转译起始密码子一9处加有合成BamHl连接序列的转移载体质粒pAc—MV。 再与从乙肝病毒adw亚型的表面抗原基因HBng亚克隆株pYPss一1分出带有Ban·Hl粘性末端的HBsAg基因,构建表达载体质粒pAc—MV—HBsAgo经与野生型AcNPV DNA对Spodoptem 7rugJPerda细胞共转染,借助同源交换,获得插有HBsAg基因的多角体缺陷的重组病毒。根据HBsAg诊断血球凝集试验和HBs^g诊断酶标免疫测定,表明重组病毒使HBsAg基因在昆虫细胞中得到了表达,免疫电镜显示表达产物呈球状颗粒,大小约为22nm。表达产物粗制品按1μg／鼠对bal b／c鼠免疫,并于三周后强化免疫能产生抗体。由HBsAg纯样品酶标免疫法标定的标准曲线估计每升培养物的表达产物约{一8mg,细胞量为1一2×106个/ml.用重组病毒感染玉米螟4龄幼虫,也获得HBsAg基因的表达,展示了简易生产HB sag诊断试剂和疫苗的可喜前景。     

三角帆蚌瘟病的研究II．三角帆蚌瘟病的病原——一种嵌砂样病毒

从自然发病与人工感染发病蚌分离的三角帆蚌瘟病病毒(HcPV)呈球形、类球形,大小差异悬殊,直径45--296nm。病毒颗粒外被一层表面突起和类脂质的囊膜。核衣壳呈串珠状,直径10一12nm,卷曲于细胞浆内,可超过1000nm。超薄切片中病毒颗粒积聚于细胞浆与内质网中。超微病变的主要特征：内质网高度扩张,核糖体增殖并凝聚,胞浆内出现包裹着病毒的层卷状结构。病毒核酸对RNA酶敏感,对DNA酶不敏感,经聚丙烯酰胺凝歧电泳,出现。条大分子带与1条低分子带。HcPV的上述特征与嵌砂样病毒基本吻合。因此认为三角帆蚌瘟病的病原是一种嵌砂样病毒。     

牛促卵泡激素α亚基cDNA的克隆与序列分析

从牛脑垂体中提取总RNA, 分离mRNA, 反转录获得cDNA, PCR扩增获得长为380 bp的牛促卵泡激素α亚基cDNA片段, 将它克隆于pUC19中, 进行序列分析, 结果表明: 所克隆的α亚基基因编码区序列与Erwin所发表的序列基本相同, 仅编码第24位赖氨酸的密码有差异, 同时将所获基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列与人、啮齿类的同类基因相比较, 具有很高的同源性.