罗氏沼虾苗种肌肉白浊病诺达病毒的分离和特性研究

本实验在以往罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)苗种肌肉白浊病病毒致病性的基础上对病毒特性进行深入研究。病虾除菌过滤液以1：50和1：250浸泡感染可复制出典型的症状，病毒对氯仿抵抗；用PEG法浓缩病毒后，35000r／min超速离心部分纯化病毒，在电镜下可观察到大量直径24nm的球形病毒颗粒，无囊膜，此外还观察到大小为14nln的病毒粒子；采用Trizol试剂对病毒进行了核酸提取，电泳结果发现有4条核酸条带，分别为3．0kb、1．3kb、0．8kb、0．75kb，对RNA核酸酶、S1核酸酶敏感，对DNA酶抵抗．为单链RNA病毒。用罗氏沼虾诺达病毒核酸探针进行分子杂交，探针可与提纯核酸及病虾样品匀浆液反应，Southern杂交表明3．0kb、1．3kb条带分别属于诺达病毒的RNAl和RNA2。对不同的发病样品进行了核酸电泳，4个典型症状的样品均存在诺达病毒条带，2个样品还存在小病毒核酸。上述结果表明，诺达病毒是引起罗氏沼虾苗种肌肉白浊病的主要病原。14nm小病毒与罗氏沼虾肌肉白浊病中的关系有待进一步的研究。     

用ELISA检测人血清中茶毛虫核型多角体病毒

用间接ELISA法,以109份人血清作为抗原及抗体,与茶毛虫核型多角体病毒及其抗血清进行检测,以确定茶毛虫核型多角体病毒对人群的安全性,结果均呈阴性反应。试验说明,茶园应用茶毛虫核型多角体病毒杀虫剂对人群无害。     

真核表达载体pcDNA3.1（＋）-vp28的构建及其在细胞中的表达

[目的]为研究对虾白斑综合征病毒（WSSV）囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础。[方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。[结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致。对pcDNA3.1（＋）-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5409和610bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1（＋）-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,pcDNA3.1（＋）-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符。[结论]pcDNA3.1（＋）-vp28在293T细胞中可成功表达VP28。