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| 真核表达载体pcDNA3.1（＋）-vp28的构建及其在细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 姜坤,黄健,张峥,成君军,石正丽,刘庆慧.真核表达载体pcDNA3.1（＋）-vp28的构建及其在细胞中的表达[J].安徽农业科学,2010,38(22):11732-11734. |
| 作者姓名： | 姜坤 黄健 张峥 成君军 石正丽 刘庆慧 |
| 作者单位： | 1. 青岛农业大学动物科技学院,山东青岛,266109;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071 2. 中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071 3. 中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071;中国科学院武汉病毒研究所,湖北武汉,430071 4. 中国科学院武汉病毒研究所,湖北武汉,430071 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划课题，国家高技术发展计划(863计划)课题，公益性行业(农业)科研专项经费项目，国家虾现代产业技术体系 |
| 摘 要： | 目的]为研究对虾白斑综合征病毒（WSSV）囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础。方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致。对pcDNA3.1（＋）-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5409和610bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1（＋）-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,pcDNA3.1（＋）-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符。结论]pcDNA3.1（＋）-vp28在293T细胞中可成功表达VP28。 |
| 关 键 词： | WSSV vp28 细胞转染 293T细胞 |
Construction of Eukaryotic Expression Vector pcDNA3.1(+)-vp28 and Its Expression in Cell |
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| JIANG Kun et al.Construction of Eukaryotic Expression Vector pcDNA3.1(+)-vp28 and Its Expression in Cell[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2010,38(22):11732-11734. | |
| Authors: | JIANG Kun |
| Affiliation: | JIANG Kun et al (College of Animal Science , Technology,Qingdao Agricultural University,Qingdao,Sh,ong 266109) |
| Abstract: | Objective] The aim was to lay a foundation for researching the action mechanism between peplos protein of white spot syndrome virus (WSSV) and cell in prawn.Method] PCR amplification method was used to construct recombinant eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+)-vp28 of peplos protein v28 containing WSSV.The calcium phosphate co-precipitation method was used to transfect recombinant plasmid into 293T cell.The SDS-PAGE and Western blot were used to detect expression product.Result] The PCR amplification... |
| Keywords: | WSSV vp28 |
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