针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用

目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响. 方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2/neu的mRNA表达,Western blot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长. 结果:肺腺癌细胞系SPC-A-1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPER-siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P＜0.05). 结论:成功构建了HER2/neu RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.     

siRNA抑制HER2/neu过表达肺腺癌细胞生长和增殖

背景与目的：30％NSCLC存在HER2／neu过表达，与肿瘤发生、转移、肿瘤血管形成、抗凋亡及化疗耐药等有关。本文通过RNA干涉抑制肺腺癌细胞SPC—A-1 HER2／neu过表达，观察肿瘤细胞周期、增殖及集落形成能力的变化。方法：构建针对HER2／neu的siRNA重组质粒，稳定转染SPC—A-1，通过RT—PCR和Western Blot检测HER2／neu表达；FCM分析细胞周期；MTT法观察细胞增殖，绘制细胞生长曲线；平板集落形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力。结果：成功构建了HER2／neu的siRNA重组质粒，稳定转染靶细胞后可显著降低HER2／neu表达；与亲代细胞相比，G0／G1期细胞增加17．1％，S期细胞减少12．8％；细胞生长速度减慢，集落S1抑制率达到49．0％。结论：针对HER2／neu的siRNA可以显著降低肺腺癌细胞过表达HER2／neu，肿瘤细胞阻滞于G0／G1期，造成细胞增殖减慢，集落形成能力明显下降。因此，siRNA对过表达HER2／neu肺癌的治疗具有潜在应用价值。     

胃癌细胞MKN-45和SGC-7901中MTA1的泛素化修饰及其对MTA1表达的影响

目的 :转移相关基因1(metastasis associated 1,MTA1)已知与肿瘤转移密切相关,且与胃癌恶性程度明显相关,并可以通过影响信号转导途径发挥其功能,本研究拟确定MTA1是否可以被泛素化途径所调控。方法:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞后,以IP/WB实验检测MTA1的表达水平,并将带Myc标签的MTA1质粒以及带HA标签的泛素(HA-Ub)质粒转入该细胞,检测Myc-MTA1的表达。结果:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞MKN-45、SGC-7901后,MTA1表达水平显著增加;免疫共沉淀实验显示泛素分子可以与MTA1直接结合,并且实验组较对照组相比泛素化程度明显增加;将HEK293细胞以si MTA1处理封闭MTA1的表达后,将Myc-MTA1质粒以及HA-Ub质粒转入该细胞,发现当后者存在时Myc-MTA1可被强烈泛素化。结论:在胃癌细胞中MTA1是可被泛素化途径修饰的蛋白。     

OPRM1基因多态性对癌痛患者使用芬太尼透皮贴剂镇痛效应的影响

目的：探讨OPRM1基因多态性对癌痛患者使用芬太尼透皮贴剂镇痛效应的影响。方法采用数字评分法（NRS）对123例癌痛患者使用芬太尼透皮贴剂前后的疼痛程度进行评估,记录患者NRS≤3时使用的剂量。利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）进行OPRM1多态性位点检测,比较不同基因型患者间使用芬太尼透皮贴剂镇痛剂量的差异。结果 OPRM1突变频率为32.9%。123例患者中有66例突变,其中野生纯合型（A/A型）患者57例（46.34%）,突变杂合型（A/G型）患者51例（41.46%）,突变纯合型（G/G型）患者15例（12.20%）。G/G型患者使用芬太尼透皮贴剂剂量与A/A型、A/G型相比明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。A/A型与A/G型患者使用芬太尼透皮贴剂剂量相比无显著性差异（P>0.05）。不同基因型组间不良反应发生率差异无统计学意义（P<0.05）。结论 OPRM1基因有可能成为预测癌痛患者使用芬太尼透皮贴剂疗效的一个重要参考指标,并为镇痛的个体化治疗提供理论依据。     

针对ERα的RNA干涉对人乳腺癌Bcap-37细胞生长的抑制作用

目的:探讨针对雌激素受体(ERα)分子的RNA干涉对肿瘤细胞生长的影响.方法:人工合成编码siRNA的脱氧寡核苷酸链,经磷酸化后退火连接进pSUPER载体.挑取和扩增序列正确的重组载体,稳定转染Bcap-37细胞后分别以RT-PCR和间接免疫荧光检测mRNA及蛋白质的表达情况, MTT法检测RNAi对细胞生长的影响.结果: siRNA表达载体转染后ERα表达水平明显降低,细胞增殖减慢.结论:针对ERα的RNA干涉可在体外抑制Bcap-37细胞生长.     

HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭

目的：探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法：构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果：成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论：RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。     

靶向于HER2的siRNA表达载体在人乳腺癌细胞SKBr-3中的表达

目的:探讨针对HER2分子的RNA干涉对乳腺癌细胞生长的影响.方法:人工合成DNA,经退火磷酸化后克隆入pSUPER载体.基因转染后通过观察细胞形态和细胞计数等方法验证发夹状小干涉RNA(siRNA)对细胞生长状态的影响,以激光共聚焦检测基因表达情况.结果:siRNA表达载体转染后可以引起SKBr-3细胞大量死亡,间接免疫荧光检测出HER2蛋白表达降低.结论:针对HER2进行RNA干涉可在体外抑制SKBr-3细胞生长.     

HER2 interacts with CD44 to up-regulate CXCR4 via epigenetic silencing of microRNA-139 in gastric cancer cells

人表皮生长因子受体家族分子HER2(erbB2/neu)在包括乳腺癌、胃癌在内的多种肿瘤细胞表面特异表达,并与肿瘤的转移和预后不良密切相关。作为生长因子受体,HER2信号促进肿瘤生长和增殖的机制多有报道。趋化因子SDF-1及其受体CXCR4是介导肿     

EphA2蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨EphA2蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法 采用免疫组化EnVision法检测72例DLBCL及10例正常淋巴结组织中EphA2蛋白的表达情况,分析DLBCL组织中EphA2蛋白表达与性别、年龄、分期、B症状、乳酸脱氢酶（LDH）、国际预后指数（IPI）及病理分型等临床病理特征的关系,随访DLBCL患者的生存情况并分析中位生存期（OS）和无进展生存期（PFS）,同时采用Cox多因素分析影响预后的独立因素。结果 DLBCL组织中EphA2蛋白的阳性表达率为58.3％（42／72）,高于正常淋巴结组织的20.0％（2／10）,差异有统计学意义（P＜0.05）;EphA2蛋白表达与分期、病理分型有关,而与性别、年龄、B症状、LDH和IPI均无关（P＞0.05）。全组的中位PFS和OS分别为15.5和22.0个月, LDH是影响PFS和OS的独立预后因素,IPI仅是影响PFS的独立预后因素,分期、EphA2蛋白表达均是影响OS的独立预后因素（P＜0.05）。结论 EphA2蛋白在DLBCL中高表达,其表达与分期、病理分型有关,EphA2阳性表达提示预后不佳。