小鼠肺腺癌LA795细胞不同转移率克隆株的分离及其膜脂性质的研究

从LA795细胞系的15个克隆株中选出LA1,LAE,LAD,和LA5株,其细胞电泳率分别为:0.865,0.869,1.101,1.320。结果表明:瘤细胞电荷性质的变化同它在同基因动物体内的自发肺转移能力有明显的相关性,其转移率分别为0％(0/25),0%(0/25),16%(4/25)和32%(8/25)。对四个克隆株瘤细胞膜脂性质的测试显示,克隆株瘤细胞转移能力的变化与膜脂性质的变化也显示了明显的相关性。总结果提示,LA795瘤细胞克隆株转移潜能的变化与其细胞整体性质的变化有关。这一结果对进一步认识肿瘤转移的机制有重要意义。     

高低转移大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980间甲基化差异基因的初步研究

背景与目的 肺癌是人类肿瘤中最容易发生侵袭转移的恶性肿瘤之一.影响肺癌患者预后及生存的 最主要因素是远处转移.本文旨在分析具有相似遗传背景和不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株间基因甲基化的 差异,为深入研究肿瘤转移机制提供充分的目标基因选择和发现肿瘤相关的新基因的机会.方法 应用全基因组甲 基化芯片杂交技术分析具有相同遗传背景和不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980之间差异甲基化基 因,并运用生物信息学的方法分析这些差异基因.结果 与NL9980相比,在L9981细胞株中有1 552个高甲基化DNA 片断共涉及735个基因,其中656个已知基因及79个未知基因.低甲基化DNA片段1 787个,涉及809个基因,其中698 个已知基因及111个未知基因.这些基因涉及细胞生物进程及其调节、基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运 动、细胞粘附及血管生成等.结论 抑癌基因及信号通路负向调节基因的高甲基化及癌基因、细胞粘附因子的低甲 基化可能与L9981的侵袭性及克隆能力强有关.     

应用SYBR green Ⅰ荧光PCR研究GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间的相关性

背景与目的谷胱甘肽S转移酶M1(glutathione S-transferase M1,GSTM1)基因是参与体内多种致癌物代谢的重要的II相代谢酶,其基因多态性被认为与人肺癌遗传易感性有关。本研究旨在探讨天津地区汉族人群GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间的关系。方法采用SYBR green I实时荧光PCR熔解曲线分析方法检测天津地区265例肺癌患者和307例对照者GSTM1基因多态性,应用病例对照研究分析其与肺癌易感性及不同病理类型之间的关系。结果①GSTM1(-)基因型在肺癌组和对照组的分布频率分别为56.6%和57.0%,两组之间无统计学差别(χ2=0.831,P=0.362)。经性别、年龄、吸烟状况调整后分析,携带GSTM1(-)基因型个体未增加患肺癌危险性(OR=0.840,95%CI:0.578-1.221,P=0.362)。②按病理分层分析GSTM1基因型与肺癌各病理类型之间的关系,其中鳞癌、腺癌、小细胞肺癌与其它病理类型肺癌患者GSTM1(-)基因型分布频率分别为65.8%、48.5%、47.8%和52.2%,与对照组相比,不同病理类型患者肺癌危险性均无明显统计学差异(P0.05)。结论在天津地区人群中GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性之间无相关性。     

NM23-H1基因调控肺癌侵袭转移相关基因的研究

目的 研究与NM23-H1基因有关的肺癌侵袭转移相关基因.方法 在抑制消减cDNA文库的基础上制备基因表达谱芯片.经芯片杂交、克隆测序及同源性分析得到人大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-nm23-H1各差异表达基因的信息,再以实时荧光定量PCR技术对筛选出的差异基因作进一步的验证.结果 成功制备了人大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-nm23-H1差异表达基因的基因表达谱芯片.经测序及同源性分析发现19个差异表达基因.经荧光定量PCR验证发现转染NM23-H1后,L9981细胞中PSMA7、SBDS,ODC1,YARS、CSDA、PTP4A1、SHPRH和TDMM78个基因的mRNA表达上调,PKM2和GMNN基因的mRNA表达下调.结论 NM23-H1基因可能为转移相关的上游调节基因,它可通过对下游一系列基因进行调节而实现对肺癌转移潜能的抑制作用.     

新一代基因测序技术及其在肿瘤研究中的应用

基因测序技术的进步,为分子生物学的发展,起到了巨大的推动作用。传统的基因测序技术的重要代表,是所谓的Sanger测序法,这是一种以末端终止法为原理建立起来的技术[1]。20世纪90年代开始启动的人类基因组计划,就是将Sanger测序法加以自动化的改进之     

Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达

背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。     

同源序列对CYP2A13基因SNP研究的影响

背景与目的已有研究表明:细胞色素P450酶2A13(cytochrome P4502A13,CYP2A13)在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与疾病关联中起重要作用。细胞色素P450酶是一组同工酶,基因序列间有高度的同源性,可能对SNP分析产生影响。本研究初步探讨同源序列对CYP2A13基因SNP研究的影响。方法应用Taqman探针检测573例人群rs8192789位点的分布,采用BLAST方法分析引物结合序列。对60例样本的CYP2A13序列进行测序,进一步进行了TA克隆测序,应用BLAST方法分析了克隆测序结果。结果rs8192789位点在573例人群中只有3例为TT纯合型,其余均为CT杂合型,BLAST分析为同源序列导致。60例人群CYP2A13部分序列测序结果完全一致,有大量套峰,101氨基酸位点处没有dbSNP数据库中报道的SNP位点。克隆测序为247bp、235bp两个片段。结论CYP2A13的同源序列对SNP研究造成了干扰,部分SNP位点可能是不存在的。     

"睡美人"转座子及其在肿瘤研究中的应用

转座子,或者叫跳跃基因,最早由美国的细胞遗传学家Mc-Clintock在研究玉米时发现的[1],是指一些能够从一个染色体位置转移到另外的位置的核酸序列。Mc-Clintock也因为发现了转座子而获得了1983年的诺贝尔