增殖性腺病毒CNHK600-p53的构建及对胰腺癌细胞抑制的体外实验研究

目的 探讨携带p53基因的新型增殖性腺病毒CNHK600-p53的导入能否增加胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察化疗药物5-FU、丝裂霉素(MMC) 和表阿霉素(epirubicin, EPI)单独应用及与CNHK600-p53联合应用对胰腺癌细胞株PANC1的杀伤效应.结果 PANC1在5-FU浓度为400 μg/ml时细胞抑制率为(65±4.2)%,MMC浓度为1 μg/ml时细胞抑制率为(41±1.9)%,EPI浓度为10 μg/ml时细胞抑制率为(65±1.8)%.转入CNHK600-p53(MOI = 0.625)后再使用上述浓度的化疗药物,PANC1的细胞抑制率分别为(89±5.3)%、(60±2.3)%和(75±1.5)%.当MOI值为0.3125、0.625、1.25时,CNHK600-p53组和Ad-p53组的细胞抑制率分别为(27±2.5)%、(30±3.7)%、(61±4.3)%和(4±2.7)%、(5±3.5)%、(16±4.5)%.结论 单用CNHK600-p53效果优于Ad-p53,携带p53基因的CNHK600-p53能提高胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性.     

肝细胞核因子4α对肝肿瘤细胞功能基因表达的影响

目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α（HNF4α）和绿色荧光蛋白（GFP）的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α，体外感染人肝肿瘤细胞株，观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录（RT）-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段，利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α，经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α；将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B，通过RT—PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达；同时观察外源导人HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α；经293细胞包装，4d后观察到GFP明显表达，反复扩增最终获得约1×10^10efu／ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α；AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后，有约90％以上的细胞表达GFP，HNF4αmRNA表达明显上调，蛋白表达分别增加3．4倍（HepG2）和5．2倍（Hep3B）；同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调，且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达，同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强，肿瘤细胞生物学特性明显改善，这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。     

人肝源性细胞株研究现状

自1954年第一株人肝源性细胞株建立至今，已成功构建了上百株人肝源性细胞株及亚株，这些细胞株的构建为探讨肝细胞的细胞生物学特点、生理生化功能以及开展各种肝脏疾病尤其是肝纤维化、肝脏代谢性疾病、急慢性肝功能衰竭、不同类型肝炎的临床研究有着十分重要的意义。近年来，随着肝细胞株在肝细胞移植（hepatocyte transplant，HCT）、人工肝等领域的广泛应用，建立新一代功能齐全、无致瘤性、不引起宿主免疫反应、方便经济的人肝源性细胞株已成为研究热点。本文就人肝脏组织来源细胞株的构建、生物学特性及应用研究等方面作一综述。     

经皮肝穿刺射频消融与再次肝切除对复发性小肝癌的随机对照研究

目的 对于小肝癌(直径＜5 cm)而言,经皮肝穿刺射频消融可取的与手术相似的效果.我们期望了解其对复发性小肝细胞肝癌的疗效.方法 将我院2009.01-2011.11月收治的61例患者根据入组标准:复发性肝细胞癌,单发,直径＜5 cm.随机分为两组,26例行经皮肝穿刺射频消融(Percutaneous radiofrequency ablation,PRFA)35例再次肝切除治疗.结果 再次手术组和PRFA组的复发间隔时间分别为(1239.60±1017.00)和(903.42±975.11)天(P =0.066).两组的无瘤时间分别为(310.23±159.50)和(278.27±123.29)天(P=0.584).再次肝切除组和PRFA组的肿瘤的大小分别为(7.34±3.16)及(5.59 ±-3.40)cm2(P=0.215),两组总费用分别为(26150.66±7923.60)和(21135±1156.76)元(人民币),两组的住院时间分别为(15.29 ±4.28)和(7.46±2.20)天(P ＜0.001).结论 对于复发的小肝细胞肝癌PRFA治疗是有效的,且优于重复肝切除术,具有创伤小恢复快.     

肝内胆管鳞癌、腺鳞癌的诊断与治疗(附5例报道与文献复习)

正肝内胆管原发性鳞癌、腺鳞癌非常罕见,国内外报道例数较少,大部分临床医生对其缺乏正确的认识,本文总结本院收治的5例病例并结合国内文献报道的9例资料总结分析重点阐述其诊断与治疗。以关键词"肝内胆管肿瘤"、"鳞癌"、"腺鳞癌"检索1966至2014年国内文献,除去重复报道情况,结合作者收集的病例共统计14例。其中男8例,女6例,平均年龄54.5岁。全部病例均经病理明确诊断,13例行手术治疗,1例不详,(详     

胰母细胞瘤研究进展

胰母细胞瘤(pancreatoblastoma, PBL)是一种较为罕见的胰腺恶性肿瘤.目前国内外共报道病例近200例[1].现就其命名、流行病学、组织病理学、诊断、治疗、预后等方面近年来的研究进展作一综述.     

胰母细胞瘤研究进展

胰母细胞瘤（pancreatoblastoma，PBL）是一种较为罕见的胰腺恶性肿瘤。目前国内外共报道病例近200例。现就其命名、流行病学、组织病理学、诊断、治疗、预后等方面近年来的研究进展作一综述。     

探究快速康复外科理念在心脏瓣膜病患者瓣膜置换术围手术期护理中的应用效果

目的 探析快速康复外科理念在心脏瓣膜病患者瓣膜置换术围手术期护理中的应用效果。方法 选择 2021 年 9 月至 2022 年 9 月期间在我院收治的 57 例行瓣膜置换术治疗心脏瓣膜病患者作为研究对象。依据诊疗先后顺序将其分为观察组（29 例） 和对照组（28 例）。对照组采用常规护理干预，观察组在对照组基础上采用快速康复外科理念干预。比较两组患者心功能、精 神状态及生命质量指标。结果 观察组生命质量显著高于对照组（P<0.05）。观察组心功能与精神状态显著优于对照组（P<0.05）。 结论 心脏瓣膜病患者瓣膜置换术围手术期实施快速康复外科理念干预，能够改善心功能和精神状态，提升生命质量。     

慢性充血性心力衰竭急性加重期合并低钾血症静脉补钾的体会

慢性充血性心力衰竭急性加重合并低钾血症在临床中较为常见,易发生室性心律失常,严重时可危及生命.患者常有明显水钠潴留,为缓解症状,需紧急进行利尿、扩血管、强心治疗,而襻利尿剂的应用可使血钾水平更低,使用洋地黄制剂又容易中毒,常规浓度静脉补钾又需大量液体增加容量负荷而对心衰不利,临床治疗较为棘手.2009年2月至2011年5月,我科共收治30例慢性充血性心力衰竭急性加重合并低钾血症患者,采用微泵静脉补钾治疗取得了较好的临床效果,现报道如下.1资料与方法1.1 -般资料30例均为我科住院患者,男21例,女9例,年龄55～83岁.其中陈旧性心肌梗死心衰12例,冠心病心肌纤维化型心衰6例,扩张型心肌病心衰5例,高血压性心脏病心衰5例,风心病心衰2例,按NYHA心功能分级均为Ⅳ级.所有患者均有不同程度胸闷、气喘、咳嗽、乏力、水肿、食欲不振、腹胀、恶心、呕吐等症状,其中肠麻痹8例,神志不清、谵妄、躁动3例.心电图表现为T波低平或倒置、U波增高、ST段压低、QT间期延长、T-U融合或频发室性期前收缩、短阵室性心动过速等.血清钾浓度1.5～2.5mmol/L,其中合并有低镁血症8例.     

新型增殖性腺病毒的构建及对肝癌细胞的抑制

目的 构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53.方法 PCR扩增p53基因,利用酶切连接方法 将其插入CNHK600载体,PCR鉴定.经293细胞包装成病毒,抽提病毒DNA,PCR鉴定.氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,TCID50 方法 测病毒滴度.病毒增殖实验检测病毒在不同细胞增殖能力.四甲基偶氮唑盐(methyl-thiazolyl tetrazolium assay,MTT)法观察CNHK600-p53、Ad-p53两种病毒分别对肝癌细胞株的抑制率.结果 成功构建新型增殖性腺病毒载体CNHK600-p53;293细胞包装成病毒,PCR方法 鉴定无野生型病毒存在;病毒滴度为1.99×10~（10）pfu/ml;CNHK600-p53在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721内复制能力明显高于正常肝细胞HEL-1和L02.对6种肝癌细胞(PLC/PRF5、SMMC7721、HepaG2、BEL-7402、BEL-7404、QGY-7703)而言,随着MOI值的不断增高.其对肝癌细胞的抑制作用也不断增强;在相同MOI情况下,CNHK600-p53组较Ad-p53组的细胞抑制率高(P＜0.05).当细胞抑制率达到80%以上时.两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用新型增殖性腺病毒CNHK600一p53较 Ad-p53能更有效的抑制肝癌细胞,可能成为肝癌的基因治疗更有效的一种基因治疗手段.